胸水p16基因纯合性缺失的检测及临床应用价值.docVIP

　　胸水p16基因纯合性缺失的检测及临床应用价值 于 薇 长春市人民医院检验科，吉林长春 130051 [摘要] 目的 探讨胸水p16基因纯合性缺失的检测及其在临床上的应用价值。方法 选取该院2010年12月—2014年6月收治的伴有胸水的肺癌患者176例，随机分为对照组和PCR组各88例，对照组应用胸水脱落细胞学检测，PCR组应用PCR技术检测纯合性缺失，比较阳性率。 结果对照组88例肺癌所致癌性胸水患者的标本中有52例出现胸水脱落细胞血阳性结果，其阳性率为59.09%；PCR组88例肺癌所致癌性胸水患者的标本中没有出现一例p16基因第一外显子纯合性缺失，但是有35例p16基因第二外显子纯合性缺失，其阳性率为39.77%。阳性对照组优于PCR组，经统计学处理差异有统计学意义（Plt;0.05）。 结论 将p16基因作为肺癌治疗的靶基因具有可行性，同时胸水p16基因纯合性缺失的检测方法不仅方便，而且准确率高，可以作为癌症检测和预后的重要辅助手段，为广大的肺癌患者带来福音，值得临床推广。 .jyqkb等发现的一种新的抗癌基因，它是细胞周期中的一种基本基因，其作用是直接参与细胞周期的调控，对细胞增殖和分裂进行负调节[3]。目前，经研究发现有细胞周期刹车装置之称的p16基因，在人类肿瘤细胞中出现纯合性缺失的现象，同时经临床研究证实很多癌症的形成都与p16基因的缺失和突变有关[4]。因此，对p16基因进行纯合性缺失的检测具有重要的临床意义。将该院2010年12月—2014年6月收治的患者为研究对象，采用胸水p16基因纯合性缺失的检测肺癌收到了较好的效果，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 将该院收治的伴有胸水的肺癌患者176例，随机分为两组，其中对照组88例，男61例，女27例，年龄41～75岁，平均年龄58岁；PCR组88例，男62例，女26例；年龄42～74岁，平均年龄58岁。两组在年龄和性别方面差异无统计学意义，具有可比性。 1.2 治疗方法 1.2.1 对照组 在征得患者同意的情况下，对患者的穿刺部位通过超声定位后，协助患者采取合适的体位，局部消毒和麻醉后，进行常规的胸腔穿刺。其具体步骤如下：用左手食指和中指将穿刺部位的皮肤固定，右手调整穿刺针的三通活栓装置，使其与胸腔处于关闭状态后，在麻醉处将穿刺针缓缓刺入，若针锋的抵抗感突然消失时，则调整三通活栓使其与胸腔相通，进行抽取胸水，抽取结束方可拔出穿刺针。取出一定量的胸水后，进行胸水脱落细胞学检测，其检测步骤如下：离心、制片、干燥、染色，其中染色尤为重要，若染色较深，则背景会影响判断；若染色较浅，则不易看出细胞的形态。染色后，将固定好的片子放在显微镜下观察，检测细胞学变化，进行结果统计分析。 1.2.2 PCR组 胸水采集的方法与对照组一致，取患者的一定量（10 mL）的胸水后，离心（3 000转/min，10 min），沉淀物加生理盐水混悬后，再加DNA提取液和相关试剂逐步提取和纯化DNA模板。在PCR扩增过程中，要加入PCR试剂，其中PCR的五种关键要素是p16第一外显子和第二外显子引物、dNTP、Taq酶、Mg2+和模板，放入PCR仪中扩增，其PCR条件是预变性94℃、5 min后，变性94℃、30 s，复性55℃、30 s，延伸72℃、30 s，将变性、复性和延伸循环30次后，再延伸70℃、5 min，最后4℃保存产品。配制2%的琼脂糖凝胶，用水平电泳仪进行电泳40 min后，紫外下扫描照相后，检测吸光度值，进行结果统计分析。 1.3 统计方法 应用SPSS11.0软件对数据进行分析，计数资料用率表示，行χ2检验。 2 结果 两组数据比较，阳性率行χ2检验，χ2 =6.17，P=0.034，P＜0.05，说明经处理差异有统计学意义，见表1。 3 讨论 肺癌是发病率较高的呼吸系统肿瘤疾病，其发病率和死亡率逐年急剧上升，并且该病的发病率和死亡率具有性别差异，其中男性患者的发病率和死亡率位居恶性肿瘤的榜首，女性患者的发病率和死亡率位居恶性肿瘤的第二位[5]，但具有较低治愈率和较高致死率的特点，对人类生命健康造成严重威胁。目前，肺癌的发病原因还没有得到明确阐述，有大量研究资料表明[6]：该病可能与吸烟、环境有重大联系，其中不吸烟的肺癌患者占吸烟肺癌患者的1/10～1/20，并且年龄越小就开始吸烟越容易患有肺癌，城市居民患有肺癌的几率比农村的患者高，其主要原因是城市大气污染要比农村更为严重。肺癌的发病原因主要是吸烟、电离辐射、职业与环境接触、大气污染、遗传因素和既往肺部慢性感染，其中吸烟是最严重的肺癌高危因素，而职业癌是常见的肺癌疾病。肺癌具有直接扩散、血行转移和淋巴道转移三种播散转移方式，其中淋巴道转移是最常见的肺癌转移方式。肺癌的临床表