116第十六章-基因工程药物.pptVIP

第十六章 基因工程药物 第一节 表达系统的特点和选择原则 原核细胞 酵母细胞 昆虫表达系统 哺乳动物细胞 转基因动物 一. 大肠杆菌表达体系 大肠杆菌表达体系的优点： 基础生物学、遗传学、分子生物学背景清楚 安全性好 寄主菌株及载体较多 外源基因可以高水平表达 培养方便、价廉、可大规模生产 问题： 转译后的加工修饰 真核细胞的某些蛋白质翻译合成后，还需要修饰，如糖基化，但大肠杆菌细胞无此功能。 细菌蛋白酶的存在 细菌蛋白酶对外源蛋白质的切割 Epo 慢性肾功能衰竭导致的贫血、恶性肿 瘤或化疗导致的贫血、失血后贫血 IFNβ 多发性硬化症 表皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 血管内皮细胞生长抑制因子 基因工程药物举例 胰岛素 第一个上市的基因工程药物。1982年，美国Ely LiLi公司使用大肠杆菌生产人胰岛素。 表达策略 ①A B链分别表达 两个工程菌株，表达产物再混合，经处理后连接成有活性的胰岛素。 缺点：由于胰岛素有三个二硫键，正确配对的机率低，最终的收率低于20％，导致生产成本高。 ② 人胰岛素原表达法 利用融合表达载体，将编码人胰岛素原的基因片断克隆在β－半乳糖苷酶基因的下游，转化大肠杆菌，表达融合蛋白。用溴化氰裂解融合蛋白，得到人胰岛素原。经体外折叠，形成正确空间结构，再用胰蛋白酶