DNA电极总结.docVIP

DNA电极修饰技术及其在 环境电化学中的应用研究 1 绪论 脱氧核糖核酸（DNA）是生命体的基因物质，在生物的生命过程中起着十分重要的作用。DNA承担着生命体的信息遗传，通过自我复制和表达来构建细胞内的生物蛋白和酶的生物合成。对DNA的分析在生物化学和分子生物学研究中有着极为重要的意义。自1953年Watson和Crick发现生物遗传分子脱氧核糖核酸的双螺旋结构以后，人们对于DNA的研究给予越来越多的关注，尤其是对于DNA与其他物质相互作用方面的研究。目前对DNA与其它小分子物质作用的技术主要有光谱技术、表面分析技术、凝胶电泳、微量热法、电化学技术等。其中电化学技术由于具有灵敏度高、所需药品量少、测试费用低和操作简单等特点而备受人们关注。 DNA修饰电极是用电化学技术研究DNA的一个重要途径，由于制备DNA修饰电极时，DNA的用量很少，并且所制成的DNA电化学传感器体积小、测试费用低、可微型化，使其在DNA研究中的应用范围扩大到传染病、流行病、肿瘤及遗传疾病等的临床检测、食品卫生检验、法医诊断、环境监控等方面。 1.1DNA修饰电极的制备 DNA修饰电极是将单链DNA(ssDNA)片段(长度一般为十几到几千个碱基不等)固定在电极表面形成DNA探针 HYPERLINK \l _参考文献 [1],这种ssDNA与目标DNA(靶基因)呈碱基序列互补,在适当的温度、离子强度、pH、缓冲溶液等杂交条件下，电极表面探针ssDNA与溶液中的靶基因发生特异选择性杂交, 形成双链DNA(dsDNA)， 从而导致电极表面结构的变化，变化的情况可通过电极表面电活性指示剂所引起电信号(如电压、电流或电导)的变化体现出来，进而可用于靶基因的定性定量分析 HYPERLINK \l _参考文献 [2]。DNA修饰电极的制备主要分为以下四个步骤： （1）将ssDNA固定到固体电极（如玻碳电极、金电极、ITO等），形成DNA探针电极。 （2）在合适的杂交条件下，将DNA探针电极放入含有目标ssDNA的溶液中与靶基因杂交，形成dsDNA。 （3）选择合适的电化学指示剂（如道诺霉素等）完成dsDNA的表达。 （4）根据所选电化学指示剂的不同，选择相应的电化学方法完成电化学信号（如电流、电压）的测定[1]。图1为采用杂交指示剂作为信号分子的核酸修饰电极的示意图。 图1-1 采用杂交指示剂作为信号分子的核酸修饰电极的示意图 这类修饰电极包含两部分：DNA探针构成的感应器和换能器（电极），它依靠生物体内物质间特有的亲合力快速、直接获取复杂体系组成信息。可见DNA修饰电极的制备基本上可以分为两个步骤：DNA探针的固定和待测定信号的转换。该类修饰电极具有选择性好、种类多、测试费用低及适合联机化的优点，又有电分析化学的不破坏测试体系、不受着色影响、操作简便的特点，能广泛应用于细茵及病毒感染类疾病诊断、基因诊断、药物分析、DNA损伤研究和环境监测等领域。 1.2 DNA固定方法 在DNA修饰电极的研制中，最为关键的一步即为如何将DNA稳定地固定在基体电极上。这在基因传感器、基因芯片以及DNA与药物小分子的相互作用研究中都是一个十要重要的课题。固体电极表面上DNA的固定量和活性直接影响传感器的灵敏度，为了有效提高DNA连接于电极表面，并保持其待测分子的特异性和结合活性，往往需要借助物理或化学方法。通常的核酸固定方法有以下几种： 1.2.1 吸附法 吸附法通常是通过非共价键作用将DNA 直接吸附到电极表面，Brett HYPERLINK \l _参考文献 [3]、Zhou[4]、庞代文[5, 6]等先后利用这一方法将单链DNA固定在石墨电极、玻碳电极、金电极和汞电极表面，制成DNA修饰电极。因为DNA分子中的磷酸骨架带负电荷，可以将预处理好的电极浸入含一定浓度DNA的溶液中，对工作电极施加一定正电位，将DNA吸附到工作电极表面。Wang[7~11]、Erdem[12]和Marrazza[13, 14]等在恒电位吸附法方面做了大量工作。利用DNA带负电荷的磷酸骨架和带正电的固体基体之间的静电作用也可固定DNA。Cai[15]、周家宏[16]等分别利用带正电荷的聚吡咯、阳离子聚合物壳聚糖和聚赖氨酸将ssDNA固定于玻碳电极表面上，提高了DNA在电极上的固定量。采用吸附法在固定DNA前一般不需要对DNA进行衍生化处理，操作简单、便捷，但DNA探针再生较难。 1.2.2 自组装膜法 自组装膜法是基于分子间化学键的作用，在固体表面自发形成高度有序的单分子膜，类似巯基烷烃的自组装单分子层[17]。一般以金电极为基体电极，利用巯基与金电极之间的Au-S键将核酸固定到金电极上。陆琪[18] 等人采用先进行-SH化合物自组装，得到自组装单分子层，再在其上共价键合或吸附固定DNA 的方