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附录：常用试剂配制及应用 一、常用缓冲液、试剂的配制 碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer) 由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH9的缓冲液配制（附表1）。 附表1. 0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7） pH 0.2mol/L Na2CO3 (ml) 0.2mol/L NaHCO3 (ml) pH 0.2mol/L Na2CO3 (ml) 0.2mol/L NaHCO3 (ml) 9.2 4.0 46.0 10.0 27.5 22.5 9.3 7.5 42.5 10.1 30.0 20.0 9.4 9.5 40.5 10.2 33.0 17.0 9.5 13.0 37.0 10.3 35.5 14.5 9.6 16.0 34.0 10.4 38.5 11.5 9.7 19.5 30.5 10.5 40.5 9.5 9.8 22.0 28.0 10.6 42.5 7.5 9.9 25.0 25.0 10.7 45.0 5.0 磷酸缓冲液(Phosphate Buffers，PB) 磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21； Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。 另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。 磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些 HYPERLINK / 生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。 NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH4的缓冲液。 Na2HPO4的pH值偏碱性，可用作pH10的缓冲液。 而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制（附表2）。 附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2） pH 0.2mol/L NaH2PO4 (ml) 0.2mol/L Na2H PO4 (ml) pH 0.2mol/L NaH2PO4 (ml) 0.2mol/L Na2H PO4 (ml) 5.7 93.5 6.5 7.0 39.0 61.0 5.8 92.0 8.0 7.1 33.0 67.0 5.9 90.0 10.0 7.2 28.0 72.0 6.0 87.7 12.3 7.3 23.0 77.0 6.1 85.0 15.0 7.4 19.0 81.0 6.2 81.5 18.5 7.5 16.0 84.0 6.3 77.5 22.5 7.6 13.0 87.0 6.4 73.5 26.5 7.7 10.5 89.5 6.5 68.5 31.5 7.8 8.5 91.5 6.6 62.5 37.5 7.9 7.0 93.0 6.7 56.5 43.5 8.0 5.3 94.7 6.8 51.0 49.0 8.1 4.2 95.8 6.9 45.0 55.0 8.2 3.0 97.0 磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS) 磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。 NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.44g KH2PO4 0.24g 在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。 Tris缓冲液（Tris-HCl Buffer, TB） Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定pH的0.05 mol/L Tris缓冲液的配制是将50ml 0.1 mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积（ml）的0.1 mol/L HCl混合，加水至将体积100ml，即为0.05 mol/L Tr