乙肝表面抗体衰减人群细胞免疫状态及影响因素研究.docVIP

乙肝表面抗体衰减人群细胞免疫状态及影响因素研究摘要：[目的]探索乙肝疫苗接种人群免疫状态和乙肝表面抗体衰减的影响因素。[方法]采用多阶段随机抽样的方法，在上海市卢湾区和松江区随机抽取600名既往全程接种乙肝疫苗的对象，将其中HBsAg、抗－HBc阴性且抗－HBs100 mIU／mL、性别相同、年龄±1岁的对象作为阳性对照组，检测IFN－γ和IL－4。[结果]多因素非条件Logistic回归模型提示，免疫年限(OR=2.01)、牙科治疗史(OR=1.55)和婚姻状况(OR=13.17)与人群乙肝表面抗体衰减存在密切联系。细胞免疫检测提示，乙肝表面抗体衰减实验研究组对象的IFN－γ阳性细胞百分比和IL－4阳性细胞百分比均显著低于实验对照组。[结论]乙肝表面抗体衰减者清除HBV的特异性细胞免疫可能和体液免疫一样均处于弱化状态，推行乙肝疫苗加强免疫策略应该是今后乙肝防治工作的重点。 关键词：乙肝表面抗体；衰减；乙肝疫苗；加强免疫 中图分类号：R512.6+2　文献标志码：A 乙型病毒性肝炎(乙肝)是全球性的公共卫生问题之一。自1981年乙肝疫苗问世以来，疫苗的保护效果、免疫原性和安全性已得到广泛认可，但随着接种时间的延长，免疫人群的保护性抗体水平逐年下降。上海市自1986年试点推行新生儿乙肝疫苗接种工作至今已近23年，本次研究通过对上海市600名乙肝表面抗体衰减对象进行流行病学调查和细胞免疫检测，旨在探索不同免疫年限乙肝疫苗接种人群的免疫状态和乙肝表面抗体衰减的影响因素，为乙肝防治工作和免疫策略的制定提供依据。 1　对象与方法 1.1对象 采用多阶段随机抽样方法，在上海市卢湾区和松江区各随机抽取3个街道，每个街道随机抽取IlO户居民家庭，每户家庭要求抽取1名1980年以后出生、全程接种乙肝疫苗、未罹患病毒性肝炎的对象，共计600名符合条件的对象入选。经乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、抗－HBs和乙肝病毒核心抗体(抗－HBc)血清学检测，将HBsAg和抗－HBc阴性且抗－HBs1000 mIU／mL为强阳性。 HBV－DNA荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测采用孟德尔的HBV PCR荧光检测试剂盒，ABI 7000荧光定量PCR仪。 细胞免疫功能测定：应用胞内因子染色流式细胞检测γ－IFN和IL-4。采集肝素钠抗凝的静脉血5 mL，分离外周血淋巴细胞(PBMC)按1：1与培养液(10％灭活胎牛血清RPMI 1640)混匀，细胞浓度维持在2×106／mL，加5μL BsAg标准品混匀后，37℃，5％二氧化碳培养12h，加2μL蛋白转运抑制剂莫能霉素(Monosin，1mg／mL，Sigma公司)，培养4 h。加细胞表面染色荧光标记的单抗试剂(Human CD3，PE－Cy5，Beckman公司)室温暗处孵育15 min。加入溶血素，室温暗处孵育10min。加固定剂，室温暗处孵育15 min，离心500 g，5 min，弃上清；加破膜剂(4％的多聚甲醛PBS溶液)室温暗处孵育10 min；加入3 mLPBS洗液，离心500 g，5 min，弃上清。加入荧光标记的细胞因子抗体(Human IL－4－PE，Human γ－IFN－FITC，Beckman公司)混匀，室温暗处孵育30 min；加入3 mL PBS洗液，离心500 g，5 min，弃上清；加入500 mL PBS上流式细胞仪计数。 1.4统计分析方法 用Epiddata 3.0软件建立数据库，使用SPSS 13.0软件进行分析，分析方法包括一般性统计描述、t检验和多因素非条件Logistic回归分析。 2　结果 2.1一般情况 本次共调查600名对象，其中乙肝表面抗体衰减组293名，平均年龄为(10.61±4.78)岁，城乡分布比例为1：1.02；人群对照组307名，平均年龄为(11.70±5.82)岁，城乡分布比例为1：0.94。乙肝表面抗体衰减组和人群对照组对象的年龄和地域分布均衡可比。 2.2乙肝表面抗体衰减情况 将600名对象按免疫年限分组，抗－HBs随免疫年限的延长呈显著衰减趋势(TrendX2=93.89，P0.05)，差异无统计学意义(表4)。 3　讨论 上海市自1986年在部分区县试点推行新生儿乙肝疫苗接种策略至今已近23年，学龄前儿童的HBsAg阳性率由1992年的7.42％降至当前的1.5％，近300万名新生儿受到乙肝疫苗的保护。然而随着接种时间的延长，免疫人群的保护性抗体水平呈明显下降趋势，尤其是免疫年限超过15年的人群。 究竟是哪些因素削弱了乙肝疫苗的免疫效果。有研究发现，随着年龄增长，人体已经建立的免疫应答可随着免疫原的排出、病原体的反复刺激、