卡托普利对白蛋白引起HK-2细胞ACE-ACE2表达影响.docVIP

卡托普利对白蛋白引起HK-2细胞ACE/ACE2表达影响［摘要] 目的 观察血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利 (captopril, CAP)对白蛋白引起的肾小管上皮细胞表达ACE、 ACE2及其作用产物Ang Ⅱ的影响。 方法 实验分组：对照组（未干预的人近端肾小管上皮细胞株，HK-2）；牛血清白蛋白（BSA）组(10?mg#8226;ml-1)； CAP组(10?μmol#8226;L-1)；BSA加CAP组。分别采用实时定量RT-PCR和Western Blot检测ACE、ACE2 mRNA和蛋白的表达水平；采用放射免疫法(RIA)检测细胞上清液中Ang Ⅱ的浓度。 结果 实时定量RT-PCR显示，与对照组比较（相对表达量为0）， CAP组ACE mRNA表达差异无统计学意义（0.27±0.09 vs 0，?P0.05）；CAP能显著抑制BSA引起的ACE mRNA表达上调[（BSA+CAP）组∶BSA组为（0.80±0.05） vs （1.58±?0.20），P0.05)（图1）。? 2.3 CAP对BSA引起ACE2 mRNA表达的影响? 与对照组比较，BSA (10?mg#8226;ml-1)作用12?h后，ACE2 mRNA 表达显著减少 (-1.35±0.13 vs 0, P0.05)（图2）。? 2.4 CAP对BSA引起ACE/ACE2蛋白表达的影响? Western blot 显示的ACE、ACE2和actin的蛋白表达情况，见图3。BSA作用12 h后ACE蛋白表达较对照组显著增加（1.2±0.10 vs 0.52±0.05，P0.05) （图4A）。与此同时，BSA作用12?h后ACE2蛋白表达较对照组显著降低（0.35±0.09 vs 1.13±0.11，P0.05）（图4B）。? 2.5 CAP对BSA引起Ang Ⅱ浓度的影响? RIA结果显示，与对照组比较，BSA可显著增加细胞上清液中Ang Ⅱ 的浓度[(97.25±10.4) vs (28.53±?3.5) ?pg#8226;ml-1，P0.05]（图5）。? 与对照组比较, #P0.05? 图5 卡托普利对白蛋白引起HK-2? 细胞上清液AngⅡ浓度的影响? 3 讨论? ACEI是最早应用于临床的RAS阻断剂，AIPRI (The angiotensin-converting-enzyme inhibition in progressive renal insufficiency study) ［4］和REIN(Ramipril efficacy in nephropathy) ［5]研究均证实，ACEI不仅可以降低血压，而且可以减少蛋白尿，从而延缓慢性肾脏病的进展。肾功能正常或轻度损害的IgA肾病患者应用福辛普利一年可使蛋白尿减少36%，而7年肾存活率达92%［6］，在非糖尿病性微量白蛋白尿患者，福辛普利也被证实可非降压依赖性地降低微量蛋白尿［7］。最近不少研究提示，蛋白尿本身就是一种肾脏毒素，会导致肾组织局部RAS激活，参与肾小管间质纤维化的形成 ［8］。ACEI的肾保护作用是否与其通过抑制蛋白尿，进而抑制肾脏局部RAS激活是一个值得探讨的问题。? 近年来越来越多的研究表明，肾脏存在独立于系统RAS的局部RAS，而局部RAS的激活在CKD的进展中发挥主要作用 ［9］。Ang Ⅱ是局部RAS最主要的效应因子，通过促进细胞产生生长因子、趋化因子及炎症因子等参与纤维化的进程 ［10］。而蛋白尿的肾毒性作用有部分是通过激活RAS而产生的。蛋白负荷可促进单侧肾切除术的大鼠近端肾小管表达肾素、ACE以及血管紧张素原增加 ［2］。在转染血管紧张素原基因的小鼠，出现血压升高、白蛋白尿，同时应用培哚普利(perindopril)的小鼠上述症状明显减轻 ［11］。? 早在20世纪80年代,人们就认识到ACEI不仅能阻断循环RAS、扩张全身血管而降低血压，而且可通过扩张肾小动脉使肾小球毛细血管静水压降低，而血浆流量并未减少，从而减少尿蛋白，延缓CKD的进展［12］。有研究表明，ACEI可抑制肾损伤后引起的TGF-β mRNA表达增加,并降低其转录，这提示ACEI可能通过抑制TGF-β的表达而抑制肾脏纤维化 ［13］。? 最近研究发现，肾脏局部RAS主要有两条效应相反的代谢途径 ［14］。血管紧张素原在肾素作用下酶解为Ang Ⅰ，后者再被ACE降解为Ang Ⅱ。Ang Ⅱ主要通过靶细胞膜上的血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1受体)发挥多种生物学效应，包括收缩血管、促进组织增生、炎症反应、纤维化等。另外，Ang Ⅰ还可被ACE2降解为Ang-(1-9)，后者再被ACE降