圣及散对胃癌SGC7901-VCR耐药细胞P-糖蛋白表达影响.docVIP

圣及散对胃癌SGC7901/VCR耐药细胞P-糖蛋白表达影响【关键词】圣和散；多药耐药；P－糖蛋白 胃癌多药耐药(multidrugresistance,MDR)是胃癌化疗失败的主要原因之一［1］，P－糖蛋白(P－glucoprotein,P－gp)是与胃癌MDR相关的主要分子，其表达水平与细胞膜通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度密切相关［2，3］。本实验主要观察中药圣和散逆转胃癌SGC7901/VCR耐药细胞MDR的作用。? 1材料与方法? 1.1材料耐长春新碱(VCR)人胃癌细胞株(SGC7901/VCR)(引自第四军医大学西京医院);RPMI1640细胞培养基(美国Gibco公司)；噻唑蓝(MTT)、曲拉通(TritonX－100)(美国Sigma公司)；抗P－gp单抗(美国Immunotech公司);流式细胞仪(美国BD公司)；5－氟尿嘧啶(5－Fu)(山东齐鲁制药厂)。? 1.2方法? 1.2.1细胞培养人胃癌耐药细胞SGC7901/VCR常规培养于含10%胎牛血清，12u/ml庆大霉素的RPMI－1640培养液中，在37℃、5%CO?2饱和湿度培养箱内传代培养。? 1.2.2药物处理将中药圣和散(SHP)(主要含党参、太子参、玄参、炒白术、薏以仁、土元、白花蛇舌草、肉苁蓉、蟾蜍、甘草)经多酶乳化流程水提后［4］，喷雾得干燥粉末，取适量磷酸缓冲液(PBS)溶解,上清用0.22um的滤过膜过滤,配制成浓度10mg/ml药液。? 1.2.3SHP逆转细胞MDR的测定取对数生长期SGC7901/VCR种于96孔板，过夜。每孔加入5－Fu(102nmol/L)与SHP(2.5,5,10mg/ml)各10ul，同时设空白对照组(不加药物，只加培养液),培养3d。加5mg/ml的MTT20ul培养4h，加二甲基亚砜150ul振荡，酶标仪595nm处检测吸收光度。计算癌细胞抑制率：癌细胞抑制率=(1－加药组A值/对照组A值)×100%。? 1.2.4P－gp的测定待测定细胞加入PBS振荡后，离心，弃上清液，加入1%TritonX－100摇匀后静置10min，离心，每管加入20ul抗P－gp－PE,其中1管加入20ulIgG2а－PE作为阴性对照，置4℃冰箱避光孵育30min，加入PBS洗液0.5ml,振荡后上机。用CellQuest软件分析。? 2结果? 2.5、5、10mg/mlSHP对SGC7901/VCR抑制率分别为57.8%、72.1%、78.5%。同时发现SHP能明显下调SGC7901/VCR细胞P－gp的表达，且随SHP浓度上升而增强。见图1。? 图1SHP对P-gp表达的影响?? 3讨论? 多药耐药是指肿瘤对一种化疗药物产生耐药的同时，对结构和作用不同的化疗药物产生交叉耐药性［5］。其产生主要是因为mdr1基因编码的P－gp表达增加。P－gp是一种分子量为170KD的跨膜糖蛋白，为能量依赖性药物外排泵，能将药物排出细胞外，导致细胞内药物的浓度降低，使药物作用减弱或丧失而获得抗药性。肿瘤化疗失败原因与P－gp的过度表达有关［3］，所以寻求低毒有效的逆转MDR药物是当前研究的热点［6］。理想的MDR逆转剂应该是对正常组织无毒或低毒，有稳定较大的体内半衰期，能主动消除。虽然许多实验已证实不少化合物可逆转P－gp介导的MDR，但正式作为逆转剂应用临床的尚少。SHP是我们近年来用于治疗恶性肿瘤的有效方剂，它能明显降低胃癌术后复发与转移率，增强化疗效果［7］。本研究提示，其增强化疗效果与降低P－gp表达，逆转MDR有关。且存在量－效关系。 本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。 1