氨基酸层析.DOC

授课对象：06级检验1-5班 课 时：4学时 离子交换树脂层析分离混合氨基酸 实验目的： 1. 了解离子交换树脂层析的工作原理及操作技术。 2. 学会用离子交换树脂层析法分离混合氨基酸。 实验原理： 离子交换树脂是一种合成的高聚物，不溶于水，能吸水膨胀。高聚物分子由能电离的性基团及非极性的树脂组成。极性基团上的离子能与溶液中的离子起交换作用，而非极性的树脂本身物性不变。通常离子交换树脂按所带的基团分为强酸(＝R＝S03H)、弱(＝COOH)、强碱(＝N+＝R：)和弱碱(＝NH2＝NHR＝NR2)。 离子交换树脂分离小分子物质如氨基酸、腺苷、腺苷酸等是比较理想的。但对生物大于物质如蛋白质是不适当的，因为它们不能扩散到树脂的链状结构中。故如分离生物大子、可选用以多糖聚合物如纤维素、葡聚糖为载体的离子交换剂。 本实验用磺酸阳离子交换树脂分离酸性氨基酸(谷氨酸I3.22)、中性氨基酸(苯丙氨酸I5.48)、碱性氨基酸(赖氨酸I9.74)的混合液。在pH5.28时条件下，它们解离程度不同，谷氨酸带负电荷，不与树脂结合，其首先被洗脱下；赖氨酸带正电荷，与树脂结合较紧洗脱最慢；苯丙氨酸带正电荷较少，与树脂结合介于前两者之间，所以在前两者之间被洗脱下来。洗脱下来的氨基酸与印三酮-TiCl3液反应显色，通过比色