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抑癌基因PTEN在膀胱移行细胞癌中表达及意义
抑癌基因PTEN在膀胱移行细胞癌中表达及意义【摘要】 目的 探讨抑癌基因PTEN在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法 采用PCR法观察40例膀胱移行细胞癌标本中PTEN的表达情况。结果 40例膀胱移行细胞癌组织中9例(22．5%)PTEN表达阳性。随着肿瘤分期的进展PTEN的改变有增高的趋势但与肿瘤的分级无显著相关性。结论 PTEN异常表达在膀胱移行细胞癌的进展中有重要作用，PTEN基因可作为评价膀胱移行细胞癌进展及预后的指标。
【关键词】膀胱肿瘤; PTEN
Expression and significance of PTEN in bladder transitional cell carcinoma
ZHAO Hai-yan，YANG Guang-tian，ZHANG Zhi-gang,et al.Department of Urology，Lianyungang Hospital Affiliated of Xuzhou Medical College,Jiangsu Province 222000,China
【Abstract】 Objective To investigate the expression of PTEN in bladder transitional cell carcinoma(BTCC)and its clinical significance.Methods Tumor samples from 40 patients with BTCC were analyzed its relationship with PTEN by PCR.Results The positive rate of PTEN was 22．5% in bladder transitional cell carcinoma.The result was not associated with grade of the tumor.The positive rate of PTEN was associated with stage of the tumor.Conclusion The abnormal expression of PTEN may play an important role in the development of bladder transitional cell carcinoma.The measurement of PTEN may have a guiding significance in BTCC.
【Key words】
Bladder neoplasms; PTEN
膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其中膀胱移行细胞癌(BTCC)占80%～90%[1]，其发病机理至今仍不清楚，一般认为与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关[2]，我们用PCR法检测抑癌基因PTEN坐位的LOH，对其在BTCC中的表达及临床意义进行探讨。
1 材料与方法
1．1 标本来源 40例膀胱移行细胞癌组织及相应外周血标本为我科2003年9月至2006年2月间手术切除的新鲜标本，均经膀胱镜活检、经尿道膀胱肿瘤电切及开放手术后病理证实为BTCC，患者年龄30～85岁，平均59．88岁，其中男32例，女8例。临床及病理分级分别是GⅠ9例，GⅡ21例，GⅢ10例；Tis～T?1期13例，T2～T4期27例。标本离体后立即置入液氮罐；手术前日抽患者外周静脉血10 ml加ACD液抗凝，二者编号保存在-76℃超低温冰箱中备用。另取20例正常膀胱黏膜标本做对照，标本采集方法同上。
1．2 DNA的提取 上述标本经蛋白酶K消化后,采用经典的酚-氯仿-异戊醇抽提法稍加改进提取标本DNA，紫外分光光度计定量后稀释至浓度100 mg/L备用。
1．3 引物设计 参阅文献，PTEN引物序列特征见表1。
1．4 PCR扩增 在50 μl反应体系中，加入基因组DNA100 ng，10×PCR缓冲液5 μl,25 mmol/L MgCl2 3 μl，2 mmol/L dNTP混合液5 μl，上?下游引物各1 μl(20 μg/200 μl)，Taq DNA聚合酶1．5 U，蒸馏水37 μl，石蜡油(封闭)40 μl：PCR反应条件:变性95℃ 5 min，94℃ 1 min，退火条件53℃ 1 min，延伸条件72℃ 1．5 min，27个周期循环，而后72℃保持10 min延伸。
1．5 8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳：配制并灌制8%变性聚丙烯酰胺凝胶，大小为20 cm×30 cm×0．04 cm，1～1．5 h自然凝固后，撕去底边胶带，固定在垂直电泳槽上
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