脑梗死家兔模型内皮损伤程度及梗死范围关系.docVIP

脑梗死家兔模型内皮损伤程度及梗死范围关系【摘要】 目的 研究脑梗死动物模型脑血管内皮损伤的程度与梗死范围的关系,探讨脑梗死的病理生理机制。方法 选取家兔24只,分为假手术组、梗死组、药物干预组各8只。梗死组与药物组动物采用光化学诱导法制成大脑中动脉梗死模型。其中药物组家兔在术前5 d经胃灌入内皮保护药物通心络0.5 g/(kg#8226;d)。各组动物均在术后24 h抽血检测:一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)、血管性血友病因子抗原(vWF:Ag),P-选择素(GMP-140)。比较三组间的检测结果。梗死组与药物组动物用TTC法行梗死范围测定。两组之间进行比较。在梗死组,测定的各内皮损伤指标与梗死范围作相关性分析。结果 梗死组动物血中NO、t-PA明显低于假手术组(P 【Key words】 Cerebral infarction;Vascular endothelial injury;Cerebral infarction size 作者单位:221006江苏省徐州医学院附属医院西院内科(杜学军); 徐州市中医院神经内科(李利斌);河北以岭药业有限公司科研处(董群芳) 内皮损伤是脑梗死的重要病因之一[1]。然而,内皮损伤程度与梗死范围的关系国内报道较少,尤其是在经保护内皮药物的干预下梗死范围是否会有变化,国内外均罕见报道。本研究在制备家兔脑梗死动物模型基础上进行内皮损伤的多指标检测,包括一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI-1)、血管性血友病因子抗原(vWF:Ag),P-选择素(GMP-140),进一步探讨脑梗死发生、发展的病理生理机制。现报告如下。 1 资料与方法 1.1 动物选择、分组与处理 选取成年健康家兔24只(徐州医学院动物实验中心提供),雌雄各半,平均年龄4个月,平均体质量(2.5±0.2)kg。随机分为假手术组8只,梗死组8只,药物干预组8只。各组动物在年龄、体重、性别上无显著差异。其中药物干预组家兔在术前5 d经胃灌入内皮保护药物通心络0.5 g/(kg#8226;d)(河北以岭药业公司提供)。所有动物均术前肌内注射庆大霉素8万U预防性抗感染。氯氨酮,氯丙嗪各一支混合肌内注射以全麻动物。头部备皮,碘伏消毒。 1.2 大脑中动脉梗死模型制作: 采用光化学诱导法(photochemical induced method)[2-3]。所有家兔在麻醉后沿颅骨的中央与眼后角垂直交叉处纵行切开皮肤约2 cm,暴露颅骨,刮离骨膜,在矢状缝偏右(或偏左)0.5 cm与冠状缝后0.5 cm用颅钻钻穿颅骨,造成圆形窗洞。假手术组到此结束,梗死组与药物组动物继续进行。延耳缘静脉缓慢注入四氯四碘莹光素二钠(RB)(浓度35 g/L,总量1 ml/kg)。约3 min后用冷光源(波长540 nm,功率140LX)对准颅骨窗洞,连续照射8 min,缝合皮肤。24 h后,两组动物均出现意识障碍或偏瘫或肌张力下降,均为动物大脑中动脉梗死模型制备成功。 1.3 标本采集、处理与检测方法 24 h后延耳缘静脉抽取静脉血约5~8 ml,注入含10%EDTA30ul和抑肽酶40ul的试管中。4℃条件下以3000 r/min离心15 min,取上清液放入-30℃冰箱中保存待测。NO采用硝酸还原酶法比色测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。ET ,VWF:Ag,GMP-140,采用酶联免疫吸付法(ELISA)测定,t-PA与PAI-1活性采用发光底物法,使用德国BE全自动凝血仪。(试剂盒由上海太阳生物技术公司提供),严格按说明操作。 1.4 相对脑梗死范围测定(TTC法) 48 h后将梗死组动物断头取脑,去掉低位脑及脑干,冠状切为0.5 cm的脑片。将脑片浸于2%2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)磷酸盐缓冲液中30 min后取出,再浸于10%甲醛液中固定一周。切取梗死组织,以其质量占大脑质量百分比为梗死范围的相对指标。 1.5 统计学处理 在SPSS 13.0软件上进行。计量资料采用均数±标准差(x±s)表示。三组间比效采用方差分析,其中两两比较采用q检验。两组间比效采用t检验。相关分析采用pearson直线相关分析法,以P 脑梗死时,损伤的内皮细胞可以激活内外源性凝血系统,使凝血功能显著增强[11]。t-PA与PAI-1是纤溶系统的关键酶,主要来自内皮细胞分泌。t-PA是纤溶系统的主要启动因子,能选择性激活血凝块中的纤溶酶原,生成纤溶酶,水解纤维蛋白,溶解血栓纤维,还能抑制血小板聚集。PAI-1是t-PA的抑制物,可与t-PA形成1: