苯钠普利对肾小球硬化大鼠肾组织MCP-1影响.docVIP

苯钠普利对肾小球硬化大鼠肾组织MCP-1影响【摘要】 目的 观察苯钠普利对肾小球硬化大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaltil protein-1,MCP-1)表达的影响，探讨血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)对肾脏的保护作用。方法 雄性SD大鼠36只随机分为：正常对照组、肾小球硬化组、苯钠普利治疗组。切除肾小球硬化组和苯钠普利治疗组大鼠左肾，1周后按5 mg/kg于尾静脉推注阿霉素，正常对照组行假手术及尾静脉推注等量生理盐水，注射阿霉素后次日始苯钠普利治疗组予苯钠普利6 mg/(kgd)每天清晨灌胃1次，正常对照组和肾小球硬化组仅灌以2 ml自来水。灌胃12周后处死大鼠，切取右肾用于肾脏病理分析，免疫组化法测定肾组织MCP-1。结果 ①肾脏病理分析，肾小球硬化组多数肾小球呈节段性硬化，许多肾小球及肾小管受累；苯钠普利治疗组肾脏病变轻于肾小球硬化组，且肾小球硬化指数(GSI)明显低于肾小球硬化组(P0．01);②免疫组化结果显示正常对照组肾小管中有少量MCP-1的表达，在肾小球内几乎不表达，在肾小球硬化组和苯钠普利治疗组肾小球及肾小管内表达皆强于正常对照组(P0．01)。苯钠普利治疗组MCP-1表达较肾小球硬化组弱(P0．01)。结论 在单侧肾切除＋阿霉素注射诱导的肾小球硬化大鼠模型中，苯钠普利通过抑制血管紧张素转换酶(ACE)，减少了血管紧张素II (AngII)的生成，降低了MCP-1在肾脏中的表达，抑制或减轻了巨噬细胞浸润，进而延缓了肾小球硬化的进展。 【关键词】苯钠普利；肾小球硬化；单核细胞趋化蛋白-1 肾小球硬化是多种肾脏疾病的最终结局，影响肾小球硬化的因素众多，其中巨噬细胞在肾小球及间质中的浸润是促进肾小球硬化的主要因素之一。近年来研究发现，单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)在调节巨噬细胞浸润过程中发挥重要作用。本实验通过研究应用苯钠普利对肾病大鼠肾组织MCP-1表达的影响，为临床治疗提供相应的理论依据。 1 材料和方法 1．1 实验材料 SD大鼠：新乡医学院实验动物中心提供。盐酸阿霉素注射液(速溶型盐酸多柔比星粉针)：意大利法码西亚普强公司生产，批号：IE2031。苯钠普利(洛汀新)：瑞士诺华制药有限公司生产、北京诺华制药有限公司分装，批号：国药准字(1999)J-16号。免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。LEICA SM2400切片机：德国Leica Microsystem Nussloch 公司生产。IDA-2000高清晰度数码显微图像分析系统及图片扫描仪：中科院北京空海科技发展有限公司。 1．2 动物模型及分组 雄性SD大鼠36只，体质量为(225．08±31．27)g，随机分为正常对照组、肾小球硬化组、苯钠普利治疗组。后两组大鼠行左肾切除，肾切除1周后按5 mg/kg尾静脉推注盐酸阿霉素处理[1]，正常对照组仅行麻醉及暴露左肾但不切除左肾，1周后尾静脉推注等量生理盐水。1周后苯钠普利治疗组予苯钠普利6 mg/(kgd)每天清晨灌胃1次，正常对照组与肾小球硬化组仅给予2 ml自来水灌胃，实验期间所有大鼠自由进食饮水，于给药12周后全部处死并切取右肾备用。 1．3 肾脏病理检查 切取的右肾，置于10%中性福尔马林液中固定24 h，乙醇脱水后包埋制成石蜡块，用Leica切片机切成厚为3 μm的切片，行PAS染色(过碘酸-高雪氏染色)显微镜下观察肾脏病理改变。 采用Raji L[2]半定量方法评估肾小球硬化程度，每张切片至少观察40个肾小球，根据每个肾小球硬化灶所占肾小球比例分为5个等级。0级：基本正常；1级：肾小球硬化面积占1%～25%；2级：硬化面积占26%～50%；3级：硬化面积占51%～75%。4级：硬化面积占76%～100%；用公式计算出肾小球硬化指数表示肾小球硬化程度，每张切片肾小球平均硬化指数计算公式为：［(1×N1+2×N2+3×N3+4×N4)/每张切片肾小球总数］×100%，式中N1代表1级损害肾小球个数，……N4为4级损害肾小球个数，由两个观察者对每张切片进行盲法评分，然后取二者的平均值。 1．4 检测指标 采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶方法(SABC法)检测肾组织MCP-1的表达水平。每张切片随机选取5块阳性区域，计算单位面积平均吸光度。 1．5 统计学处理 数据用SPSS11．0软件处理，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较，方差齐者用LSD法，方差不齐者采用Duttets T?3法。以α＝0．05为检验标准，双