蛹虫草中虫草素探究进展.docVIP

蛹虫草中虫草素探究进展【摘要】 本研究综述了蛹虫草中虫草素的药理作用、检测方法、培养技术及分离纯化工艺的研究进展。为蛹虫草与虫草素进一步研究、开发奠定了基础。? 【关键词】蛹虫草；虫草素；药理作用；分离纯化 ? 蛹虫草(Cordyeeps militaris)又称北虫草，属子囊菌亚门、麦角菌科、虫草属[1]。作为冬虫夏草(Cordyeeps sinensis)替代品之一，其虫草素含量较冬虫夏草高约3～6倍 [2]。虫草素(Cordycepin) 是腺苷的类似物，分子量251，碱性，针状或片状结晶，熔点230℃～231℃，最大吸收波长为259．0 nm[3]。1951年，德国的Cunningham等[4]从蛹虫草的培养滤液中分离发现虫草素。目前虫草素的研究现正成为药物化学中一个极其活跃的领域。本研究就近年来用蛹虫草中虫草素的药理作用、检测方法、培养技术、提取方法等方面的有关研究进行综述。? 1 药理作用? 1．1 抗肿瘤 虫草素对鼠艾氏腹水癌、人鼻咽癌KB细胞、人表皮样疣、人宫颈癌Hela细胞、Lewis肺癌等具有明显的控制作用，对多种实体恶性肿瘤有很强的抑制作用[5]。因此，将其作为一种用途广泛的抗肿瘤新药来开发是未来趋势之一。 ? 1．2 抗菌抗病毒作用 虫草素能抑制病毒的RNA合成，对HIV-I型病毒有杀伤作用，对枯草杆菌[5]和鸟型结核杆菌[6]均有抑制作用。作为一种新型的广谱抗生素，以其特有的抗菌抗病毒活性，已引起全球科技发达国家的高度重视。? 1．3 免疫调节作用 Zhou等[7]报道虫草素通过诱导产生白介素-1，同时抑制白介素-2的生成，表明其具有较强的免疫调节功能。虫草素对T淋巴细胞转化也有一定促进作用[8]。? 1．4 清除自由基 机体内产生的自由基起主要作用的是SAFR和HFR，虫草素对SAFR具有较强的特异性清除作用，而虫草素和D-甘露醇等组分共同作用能有效的清除HFR[9]。? 1．5 其他作用 虫草素还具对核多聚腺苷酸聚合酶的抑制[10]、促进细胞分化[11]、重建细胞骨架[12]、抑制蛋白激酶活性[13]等多种作用。? 2 检测方法? 2．1 薄层层析法(TLC) 雷帮星等[14]将待虫草素待测样品与标准品点于已活化的薄层板上(1lO℃活化0．5 h )，待溶剂挥干后，在展开剂(氧仿:乙酸乙酯:异丙醇:水=8:2:6:0．3)中展开。挥干展层剂，将其置紫外线分析仪上，254nm显色,计算标准品和样品中各点的相对迁移率Rf。? 2．2 高效液相色谱法(HPLC) 张嘉等[15]以HPLC测定虫草素含量，其色谱条件：Symmetry C18(5 um,4．6×150 mm)色谱柱，流动相：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(ph=6．8，加1％四氢呋喃)，流速1．8 ml／min，检测波长：260 nm，进样量10 ul，灵敏度1．000AUFS，室温。? 3 培养技术? 目前虫草素的获得主要有两条途径：一是在蛹虫草子实体、菌丝体或发酵液中提取;二是人工化学合成。化学合成目前处于探索阶段，国外有报道虫草素能够人工合成，但过程复杂且产量极低 [16],因此如何提高蛹虫草中虫草素的含量并实现虫草素的工业化生产,是目前国内外研究的主要方向。在培养过程中影响虫草素含量得主要因素有以下几个。? 3．1 培养方式 近年来中国一些地方已实现蛹虫草批量栽培。蛹虫草可以用蚕或蚕蛹为寄主来培养[17]也可以用大米为培养基来栽培[18,19]，后者是目前人工培育的主要方法。? 3．2 时间影响 温鲁等[20]的研究报道随着培养时间延长，虫草素含量上升，培养40 d时的虫草素含量最高，继续培养，虫草素又逐渐减少。由于从35 d到40 d仅有少量增加，故培养时间以35 d为宜。? 3．3 温度影响 王菊凤[21]的研究发现在15℃左右菌丝体生长缓慢，在22℃左右生长最快，当温度达到25℃时，菌丝生长减速，温度能显著影响蛹虫草子实体虫草素的含量，当温度从17℃上升至25℃时，虫草素含量增加了近4倍。? 3．4 PH值影响 张红霞[22]认为不同的pH值对发酵液中的虫草素和腺苷含量具有一定的差异,在pH值4-9时，虫草素含量呈快速上升趋势，而在pH值9-10时呈下降趋势，其中pH值为9时发酵液中的虫草素含量为最高值。? 3．5 营养因子影响 毛先兵[23]的研究报道最适培养基的碳源为葡萄糖42 g/L，氮源蛋白胨15．8 g/L时其最大虫草素产量可达到（345．4 ±8．5） mg/L。毛先兵[24]在对矿物质的影响进行了评估时,确认CaCl2和FeSO4#8226;7H2O浓度最佳为0．097 g/L和0．074 g/L，虫草素