血塞通滴丸含量测定探究.docVIP

血塞通滴丸含量测定探究【摘要】 目的 建立血塞通滴丸的鉴别、含量测定方法。方法 采用TLC法鉴别血塞通滴丸中的人参皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷 R1；采用HPLC法测定本品三七皂苷R1的含量。结果 TLC鉴别方法简便、准确；三七皂苷R1在0．51～4．08 μg呈良好的线性关系, 人参皂苷Rb1在3．75～30．00 μg呈良好的线性关系。相对标准偏差（RSD）小于1%。重现性试验其相对标准偏差（RSD）小于1%。三七皂苷R1的平均回收率为100．5%，相对标准偏差（RSD）为1．74%；人参皂苷Rg1的平均回收率为99．00%，相对标准偏差（RSD）为1．63%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98．78%，相对标准偏差（RSD）为1．97%。结论 所建的TLC鉴别方法准确、特异性强、无干扰；HPLC含量测定方法简单、分离度高，完全能够控制本品质量。 【关键词】 血塞通滴丸；鉴别；含量测定；TLC；HPLC 血塞通滴丸原剂型为血栓通胶囊，收载于《部颁标准》[1]，原料为三七总皂苷，具有活血祛瘀，通脉活络的作用。用于脑络瘀阻引起的中风偏瘫，心脉瘀阻引起的胸痹心痛；脑梗死，冠心病心绞痛见上述证候者。? 1 仪器和试药? 仪器：Waters2695高效液相色谱仪。色谱柱：迪马-C18（200 mm×4．6 mm ,5 μm）。电子天平：Sartovius (万分之一天平)；METTLER TOLEDO（十万分之一天平）。化学试剂为分析纯；乙腈为色谱纯；TLC板硅胶G：青岛海洋化工厂出品。人参皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷 R1标准品由中国药品生物制品检定所供给。? 2 方法与结果? 2．1 TLC鉴别方法的比较和选择 试验通过比较《部颁标准》收载的原剂型血栓通胶囊质量标准中的鉴别方法和《中国药典》[2]（2005年版）中三七的鉴别方法。发现原剂型收载的方法分离度小，难以分离完全，借鉴《中国药典》（2005年版）中三七的鉴别方法，各组分得到很好分离，从而确定了滴丸中三七皂苷的TLC鉴别。? 取血栓通滴丸0．10 g，加甲醇10 ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品，加甲醇溶解，制成每1 ml各含2．5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版#8226; 一部 附录VIB)试验，分别吸取上述两种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365 nm）下检视，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。? 2．2 含量测定方法的研究? 2．2．1 血栓通滴丸含量测定条件试验[3-5]在参考文献的方法的基础上，对本品的HPLC 洗脱溶剂进行了摸索，比较了甲醇、不同浓度的乙腈以及不同浓度梯度、不同时间梯度的洗脱效果，最后确定为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下列梯度洗脱。见表1。? 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下列梯度洗脱。流速为1．0 ml/min，检测波长203 nm，柱温：40℃，理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算，应不低于4 000；人参皂苷Rg1峰和三七皂苷R1峰的分离度应大于2．0。重复进样，其相对标准偏差（RSD）应小于2．0%。? 对照品溶液的制备分别取60℃减压干燥2 h的对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1适量，精密称定，加20%乙腈制成每1 ml含三七皂苷对照品0．2 mg，人参皂苷Rg1对照品1．5 mg，人参皂苷Rb1对照品1．5 mg的混合溶液，即得。? 供试品溶液的制备取本品20丸，研细，称取粉末适量(约150 mg)，精密称定，置于10 ml量瓶中，加20%乙腈溶解，并稀释至刻度，摇匀，用0．45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。? 分别精密吸取供试品溶液10 μl与对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，依法测定，记录其峰面积，以外标峰面积法进行计算，即得。? 2．2．2 线性考查 准确吸取对照品溶液2．5、5．0、10．0、15．0、20．0 μl注入HPLC仪中，按上述液相条件，依法测定（照中国药典2005年版附录VID测定），记录其峰面积，并计算。实验结果见下表2。? 经计算：三七皂苷R1的线性相关系数r=0．999987? 回归方程为 y=336953．4x-11615．5? 人参皂苷Rg1的线性相关系数