贵州不同产地千层塔中石杉碱甲含量探究.docVIP

贵州不同产地千层塔中石杉碱甲含量探究摘 要 目的：[HTSS]比较贵州不同产地千层塔中石杉碱甲的含量。方法 采用ZORBAX EXTEND-C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相：0．02molL-1磷酸二氢钾-乙腈（92∶8），检测波长：312 nm。结果 在贵州3个不同产地的千层塔中，以黔东南地区产千层塔中石杉碱甲的含量最高。结论 该方法易行、灵敏、准确。关键词 千层塔；石杉碱甲；高效液相色谱?? 千层塔为石杉科石杉属植物蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb．）Trev．）的全草，主要分布于我国西南地区，生于杜鹃花下、苔藓丛中，为我省民间常用中草药［1］。20世纪80年代，石杉碱甲(Hup A)被我国科学工作者从该植物中分离得到，药理实验表明：它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，对重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的治疗效果［2-3］，现已广泛应用于临床。为了科学、合理地利用石杉属植物资源，本实验采用HPLC法对我省黔东南地区、遵义地区及黔西南地区等3个不同产地千层塔中石杉碱甲的含量进行测定，为寻找和筛选石杉碱甲新的植物资源提供科学依据。 1 仪器与试药? Aigent 1100型HPLC色谱仪(带四元泵，自动进样器，紫外检测器等)；电子分析天平（日本岛津）；KQ50B超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械厂）；石杉碱甲对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100243-200401）；乙腈（色谱纯）；二次重蒸水；其他试剂均为分析纯。? 实验药材于2007年5月采至贵州凯里、遵义及兴义等地区，由贵州科学院生物研究所王培善研究员鉴定为蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb．）Trev．）。? 2 色谱条件? ZORBAX EXTEND-C18色谱柱（250 mm×4．6 mm，5μm），流动相0．02 molL-1磷酸二氢钾-乙腈溶液（92∶8），检测波长为312nm，流速1mLmin-1，柱温25℃，进样量为10μl。在此色谱条件下，样品中的石杉碱甲与其他峰能达到基线分离，其理论塔板数为5241，对称因子为0．95。石杉碱甲的保留时间为11．20 min，对照品与样品的色谱图见图1。 3 方法与结果? 3．1 样品的制备 精密称取实验药材细粉2g于500ml的圆底烧瓶中，用95%的甲醇提取5次，合并滤液并回收溶剂，加入2%的酒石酸溶解，用氨水调节萃取液PH值至9．0，再用氯仿萃取至Dragendorffor’ s反应呈阴性，挥干有机溶剂，用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。? 3．2 线性关系的考察 精密称取石杉碱甲对照品3mg用无水乙醇溶解并定容在100ml容量瓶中，再取1ml于10ml容量瓶中定容，浓度为0．003mgml-1，备用。在色谱条件下，分别进样1μl、2μl、4μl、8μl、16μl、32μl进行测定。以进样浓度对峰面积进行回归，得方程：Y=6597．50267X + 2．0428511，r=0．9997。可知石杉碱甲在0．015 -0．48μg之间与峰面积呈良好线性关系。? 3．3 精密度试验 取石杉碱甲对照溶液，按2项的色谱条件进行测定，结果石杉碱甲峰面积的RSD为0．63%（n=6）。? 3．4 稳定性试验 取供试品溶液，每隔2小时测定1次，考察石杉碱甲的含量变化。结果供试品在10 h内稳定，黔东南、黔北、黔西产千层塔样品中石杉碱甲峰面积的RSD分别为1．23%、0．97%、0．67%（n=6）。? 3．5 重现性试验 精密称黔东南产样品，按3．1项的要求制备供试液，按2项的色谱条件分别进行测定，结果Hup A含量的RSD为0．17%（n=6）。? 3．6 回收率试验 精密称取不同产地实验药材细粉各6份，每份1g，分别加入对照品供试液（0．003mgml-1）50 ml，按3．1项样品制备要求和2项的色谱条件，制备加样回收供试液进行测定，计算回收率。结果黔东南、黔北、黔西产千层塔中石杉碱甲的加样回收率分别为100．03%、98．76%、99．74%，RSD=0．65%、0．57%、0．37%（n=6）。? 3．7 样品的测定 按3．1项的要求精密称取样品6份，制备供试液，按2项的色谱条件进行测定，三个不同产地千层塔中石杉碱甲的含量见表1。 4 讨论? 4．1 本实验所用测定方法是在其它石杉中石杉碱甲含量测定［4］方法的基础上，改用ZORBAX EXTEND-C18色谱柱及以0．02 molL-1磷酸二氢钾-乙腈溶液（92∶8）为流动相。实验证明该方法易行、灵敏、准确、可靠。? 4．2 作为全国四大中药材