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高原低氧对大鼠血管内皮细胞NO生成影响【摘要】目的观察NO供体药单硝酸异山梨酯和NO合酶(NOS)抑制剂L－NAME对SD大鼠(平原组)与SD大鼠(高原组)的不同作用，探讨高原低氧对血管内皮细胞NO生成的影响。方法SD大鼠灌胃单硝酸异山梨酯，用SD大鼠腹腔注射L－NAME阻断NO生成，测SD大鼠血压和SOD值。结果高原组较平原组大鼠血压升高，SOD值存在不同。结论高原低氧环境下SD大鼠NO合成减少，可能是存在NO通路多个环节的障碍――底物的减少、NOS活性的降低和血管平滑肌细胞对NO不敏感等。? 【关键词】高原低氧；NO；单硝酸异山梨酯；L－NAME； NO在维持血管张力的恒定和调节血压的稳定性中起着重要作用，NO的代谢异常与心血管疾病关系密切。本实验旨在研究高原低氧环境对大鼠体内的NO合成的影响。? 1材料与方法? 1.1实验动物实验大鼠由北大医学院实验动物中心提供。SD大鼠随机选取8只，体重(265±40)g，雄性，分成3组： I对照组给予生理盐水；II单硝酸异山梨酯组；IIIL－NAME组。以上每组又分为两组:a.平原组：海拔约50mb.高原组：海拔约4000米。? 1.2药品及试剂生理盐水(天鹤药业)；单硝酸异山梨酯(上海新亚药业)；SOD试剂盒(南京建成生物)；L－NAME(美国SIGMA)；? 1.3仪器JY12001型天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂)，DNP－9052型恒温箱(上海精宏实验设备有限公司)，RBP－1B型大鼠尾压测量仪(中日友好临床医学研究所)，LD4－2A型离心机(北京医用离心机厂)，UNIC－7200分光光度计。? 1.4给药方法①单硝酸异山梨酯灌胃10mg/(kgd)(蒸馏水配成1ml)共7d;②灌胃的第3天，L－NAME组大鼠L－NAME腹腔注射300mg/kg(生理盐水配成5ml)1次。? 1.5血压测量方法将大鼠放进37°C恒温箱预热10min后，将大鼠固定于鼠笼，尾部接于RBP－1B型大鼠尾压测量仪，待其稳定后测量尾动脉收缩压。①②③组于开始灌药前3d测得尾动脉收缩压的平均值为基础血压；灌药的7d中：①②③组于每天同一时间(灌药后5h)测血压。? 1.6血浆SOD活力测法末次给药并测完血压后，将大鼠断尾取血约1ml(取血量不少于0.5ml)于肝素抗凝管中，3000r/min?离心20min，取其上层血浆10μl，按照SOD试剂盒说明书步骤操作测SOD值。? 2结果? 2.1生理盐水组平原组大鼠血压波动在正常范围内；高原组较平原组大鼠血压升高。单硝酸异山梨酯组：平原组灌药期间血压平均值与其灌药前基础血压变化不明显；高原组血压降低。L－NAME组：平原组大鼠给药后血压升高；高原组大鼠给药后血压升高明显。ⅠⅡⅢ组基础血压，7d灌药期间血压见表1。? 2.2SOD活力检测生理盐水组：平原组大鼠的SOD活力明显大于高原组。单硝酸异山梨酯组：平原组明显下降，高原组上升。L－NAME组：平原组明显下降，高原组上升。各组血浆SOD值见表2。? 3讨论? 血管内皮细胞产生的NO具有高度亲脂性，可迅速扩散(或依赖某种载体)至平滑肌细胞内，激活其中的可溶性鸟苷酸环化酶，产生大量环鸟苷酸(cGMP)［1］。细胞内的cGMP水平升高，继而激活cGMP依赖蛋白激酶(PKG)，该酶可分别使4种膜蛋白和9种胞质内的蛋白磷酸化，并使细胞内的Ca2+浓度降低，造成血管平滑肌的舒张［2］。在生理状态下，当血管受到血流冲击、灌注压突然升高时，L－arg－NOS－NO－血管平滑肌通路维持其器官血流量相对稳定，使血管具有自身调节作用。ＮＯ能够降低全身平均动脉血压，控制全身各种血管床的静息张力，增加局部血流，是血压的主要调节因子。在灌胃的ⅠⅡ组中，以生理盐水灌胃作为对照，平原组SD大鼠血压其波动范围定为正常，高原组SD大鼠的血压较之升高；Ⅱ组用单硝酸异山梨酯，外源性提供NO，平原组SD大鼠血压无明显下降的原因可能也是其体内正常的血压调节机制缓解血压的过度下降。而高原组SD大鼠单硝酸异山梨酯灌胃后，其血压下降，提示外源性提供NO可能使其体内减少的NO增多所致。Ⅲ组中，当L－NAME(NOS的竞争性抑制剂)抑制NO的合成时，SD大鼠血压升高。综上所述，外源性NO供体给药对都可以降低高原组SD大鼠较平原组SD大鼠增高的血压，对平原组SD大鼠的血压影响不大，L－NAME可升高高原组SD大鼠血压，提示高原低氧环境下SD大鼠内皮细胞NO生成减少。可能是存在NO通路多个环节的障碍――底物的减少、NOS活性的降低和血管平滑肌细胞对NO不敏感等，还有待于进一步证实。有实验证明，NOS不仅可以生成NO，还可产生超氧阴离子，可对细胞和组织器官起损伤作用，