高效液相色谱法及光谱定性测定奶粉中苯甲酸、山梨酸、糖精钠.docVIP

高效液相色谱法及光谱定性测定奶粉中苯甲酸、山梨酸、糖精钠目前，我国批准使用的食品添加剂中，苯甲酸和山梨酸作为防腐剂，糖精钠作为甜味剂被广泛使用于食品中。由于它们都是人工合成的，过量摄入会对人体造成一定损害，为此，我国对它们在食品中的最大使用量及使用范围进行了严格限制，并制定了相关的卫生标准和检测方法。按我国《食品添加剂使用卫生标准》[1]中的使用范围规定，奶粉内均不得添加苯甲酸#65380;山梨酸#65380;糖精钠。国家标准规定食品中苯甲酸#65380;山梨酸#65380;糖精钠的检验方法为气相色谱法#65380;薄层色谱法#65380;离子选择电极法和高效液相色谱法(HPLC)[2，3]，前3种方法多采用取样后先酸化，然后用乙醚等有机溶剂反复提取浓缩后再进行测定， 存在着费时费力，有机溶剂消耗量大，工作强度高等缺点。而HPLC法不仅具有分离效率高#65380;简便快速#65380;最大限度避免了使用有机溶剂等特点，并且可同时测定食品中苯甲酸#65380;山梨酸#65380;糖精钠。一般采用紫外检测器，以保留时间定性，峰面积定量。但由于色谱方法的定量能力强而定性能力弱，对于奶粉这一类成分复杂的样品来说，极有可能存在与分析目标分子量或分子结构接近的物质，在同一时间或极相近的时间出峰，给分析过程造成干扰。如果忽略了这类干扰，就会影响结果判定。因此，在有条件时应该采用色谱与质谱联用技术，可以确保定性的准确。但因为质谱仪器价格昂贵，此项技术现在还不够普及，在此情况下，我们采用二极管阵列检测器的方法。由于二极管阵列检测器可以同时在设定波长区域内的各波长下进行立体数据采集，因此，在结果中既可以察看各波长下的色谱图又可以察看各时间下的光谱图。不同的物质具有不同的光谱，因而可以用以定性。所以在分析结果时，在比对保留时间的基础之上，加以光谱确认，取得了很好的效果。只有保留时间和光谱形状两项内容都与标准一致才能确认是被测物，因而可以克服仅以保留时间一项指标定性的缺点，大大增强了定性的确定性。?? 1材料与方法? 1.1仪器? Aglient1100型高效液相色谱仪配二级管阵列检测器;超声波清洗器;Millipore Milli-QRG超纯水系统。 1.2试剂? 甲醇(色谱纯);乙酸铵溶液(0.02 mol/L):称取1.54 g乙酸铵，用超纯水溶解至1 000 mL，经0.45 μm滤膜过滤 (临用新配#65380;脱气);亚铁氰化钾溶液(106 g/L);乙酸锌溶液(220 g/L); 稀氨水(1+1);苯甲酸标准溶液(1.00 mg/mL):国家标准物质研究中心研制GBW(E)100006;山梨酸标准品(99.0%±1%):国家标准物质研究中心研制GBW(E)100007;糖精钠标准溶液(1.00 mg/mL):国家标准物质研究中心研制GBW(E)100008。? 1.3色谱条件? Diamonsil C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm);流动相:乙酸铵溶液(0.02 mol/L)-甲醇(93+7);流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm;柱温:35℃。? 1.4样品处理? 称取2~5 g(精确至0.01 g)均匀样品于50 mL具塞比色管中，加30 mL 80℃左右的热水溶解，再加人亚铁氰化钾和乙酸锌溶液各2 mL，震荡混匀后用稀氨水调pH为7.0~8.0，加水定容至刻度，超声提取20 min，用滤纸初滤，滤液过0.45 μm微孔滤膜后待测。?? 2结果与讨论? 用GB/T5009.28-2003#65380;GB/T5009.29-2003方法(色谱条件见1.3)测定，苯甲酸#65380;山梨酸#65380;糖精钠的保留时间分别为?5.631 min#65380;7.777 min#65380;9.284 min 。HPLC分析某奶粉样品发现其保留时间为?5.631 min处色谱峰与苯甲酸标准完全相同(见图1)。一般情况下必认定为苯甲酸，但其紫外光谱图却表明与苯甲酸标准品完全不同(见图2)，说明该峰不是苯甲酸。试采用将流动相中甲醇比例从7%调节至3%，结果苯甲酸标准与该峰得以分开，保留时间分别为6.880 min#65380;7.314 min(见图3)，证明结果判定是正确的。但新的问题又出现，在此条件下，样品?9.707 min处色谱峰与山梨酸标准品(RT=9.781 min)相近，样品?14.544 min处色谱峰与糖精钠标准品(RT=14.316 min)相近，通常情况下是否为山梨酸#65380;糖精钠也可能较难认定，但紫外光谱图能迅速表明两者均与标准品完全不同，说明该两个色谱峰也均是干扰组分(图4，图5)。?? 对样品分析对象的