从牛奶中分离DNA方法的建立.pdf

维普资讯 112 《乳业科学与技术》 2006年第3期 (总第 118期) 从牛奶中分离DNA方法的建立 田 雨 (南京奶业集团奶源分公司，江苏南京 210033) 摘 要：本文通过将牛奶中提取 白细胞技术和热裂解提取DNA技术相结合建立了从牛奶中提取DNA 的技术程序。结果显示，提取DNA原液的平均浓度为0．5 g／mL。通过PCR分析发现，提取DNA的浓 度 已达到 PCR反应的模板要求，可以作为一种快速的DNA提取方法。 关键词：牛奶；白细胞；DNA 中图分类号：TS252．42 文献标识码：B 文章编号：1671—5187(2006)03-0112-02 EstablishmentofM ethod ofSeparating DNA from M ilk Tian Yu (MilkBranchCompanyInNanJingDairyGroup，NanjingofJiangsu210033，P．R．China) Abstract：Integrating the isolation of leukocytes from milk and DNA rfom the cells，the isolation method ofDNA rfom milkwasbuilt．Results indicated thatthe average concentration ofisolated DNA stock solution was0．5p~g／mL．Through PCR analysis．the DNA Concentration reached the requirement ofPCR reaction；thismethodcouldbean alternativemethodofisolationofDNA． Keywords：milk；leukocytes；DNA 在分子生物学实验中，提取DNA是一项最基 头牛采50mL牛奶。为防止乳头感染，牛奶收集应 础也是最常用的技术。对于奶牛，目前分离DNA 采取以下步骤：先用毛巾擦拭乳房，去除乳房上的 的材料主要包括组织和血液，组织的收集主要采 污物 ；在小杯中注入碘酒，浸泡乳头；用 70％的酒 用剪耳法，而血液的收集主要采用尾静脉采血。我 精棉球擦拭乳头，自然晾干；丢弃第一把奶 ，在灭 们在生产实践中发现，这两种方式都会对实验动 菌管中挤入 50mL牛奶；再用碘酒浸泡乳头。 物产生应激，影响奶牛的生产水平，一方面可能造 1．2牛奶中自细胞的分离2[1 成实验结果的偏差；另一方面对实验牛场来说也 采用 目前常规的牛奶中白细胞的分离方法 ， 是一笔不小的损失。因此，找到一种对奶牛产生最 目的是尽可能的将牛奶中的乳脂和乳蛋白分离 ， 小应激的DNA提取方法，显得尤为重要。 步骤为：将上步采集的牛奶置入 50mL的离心管 奶牛具有独特的防御体系，一旦细菌入侵乳 中，以4cC、以1000r／min离 D、20rain；弃上层悬浮 房，机体就会产生大量的白细胞进入牛乳进行防 物，并用酒精棉球小心擦拭附着在管壁上的乳脂； 御，加上乳腺细胞 自身的代谢和脱落，都为牛奶中 用大约 10mL的PBS重新悬浮，并轻轻振荡，使附 提供了大量的体细胞资源——平均每毫升牛奶中 着在底部的白细胞完全悬浮；4cC，以 1000r／min离 的体细胞数达到3O万左右】1『，基本达到了提取DNA 心20min，弃上层悬浮物，用酒精棉球小心擦拭附 的细胞浓度。因此，从牛奶中分离体细胞，进而提取 着在管壁上的乳脂。如果乳脂过多，重复悬浮离心 DNA在理论上是可行的。