细胞色素P450亚酶CYP2D6(AMMC)活性荧光定量检测试剂盒讲述.docVIP

细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书 （中文版） 主要用途 细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过AMMC去甲基化酶反应系统中AMMC转化为AMHC后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶2D6的活性细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。羟基化酶（ 7-hydroxylase）的活性是细胞色素P450亚酶2的诊断标记，其基于羟基化酶选择性催化细胞色素P450亚酶2的活性。人体细胞色素P450亚酶2（CYP2；EC1.14.14.1），主要表达在括异喹胍debrisoquine）的4-羟基化鹰爪豆碱parteine）的氧化、抗抑郁症药物、神经松弛药（neuroleptic），以及内源性5-羟色胺（hydroxytryptamine。同时会产基于底物在CYP2的下，转化为羟基香豆素（）后荧光峰值的变化（激发波长nm，散发波长4nm），来定量测定细胞色素P450酶2的活性。反应系统为： 产品内容 缓冲液（Reagent A） 毫升 反应液（Reagent B） 微升 底物液（Reagent C） 微升 终止液（Reagent D） 毫升 标准液（Reagent E） 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存在－20℃冰箱里， 反应液（Reeagent B）、 底物液（Reagent C）和 标准液（Reagent ）避免光照终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月 1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器培养箱：用于孵育反应 比色皿：用于的容器 荧光分光光度仪：用于荧光分析 将－20℃冰箱里的 测定准备 准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里 设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长nm，散发波长40nm 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管 分别加入微升液（Reagent ）到每个离心管 移取微升 标准液（Reagent ）到1号管，混匀 小心移取微升1号管稀释的 标准液（Reagent ）到2号管，混匀 小心移取微升2号管稀释的 标准液（Reagent ）到3号管，混匀 小心移取微升3号管稀释的 标准液（Reagent ）到4号管，混匀 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表 管号 液（Reagent ） 标准液（Reagent ） 标准浓度 1 微升 微升 摩尔2 xx微升 微升1号管 摩尔 3 xx微升 微升2号管 4 xx微升 微升3号管 5 xx微升 空对照 0 标准曲线测定 移取微升 缓冲液（Reagent A）到5毫升管 加入微升 反应液（Reagent B） 加入微升 底物液（Reagent C） 加入微升 上下倾倒数次，混匀 在37℃温度下孵育分钟，避免光照 加入微升 终止液（Reagent D），混匀在37℃温度下孵育5分钟，避免光照 比色皿 即刻放进荧光分光光度仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准浓度（摩尔）样品测定 移取微升 缓冲液（Reagent A）到5毫升管 加入微升 反应液（Reagent B） 加入微升 底物液（Reagent C） 加入微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈） 上下倾倒数次，混匀 在37℃温度下孵育分钟，避免光照 加入微升 终止液（Reagent D），混匀在37℃温度下孵育5分钟，避免光照 比色皿 即刻放进荧光分光光度仪检测，获相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 实际荧光单位：样品相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照） 根据标准曲线样品浓度摩尔 计算样品活性 注意事项 本产品为25次操作，包括标准 操作时，须戴手套 系统操作过程中，标