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使用指导 IMMUNOSCAN RA  IMMUNOSCAN RA (Mark 2) 抗环状瓜氨酸肽抗体诊断试剂盒 (第二代) 用于检测类风湿关节炎特异性自身免疫 抗体（抗CCP的ELISA检测） 仅供专业人士使用 4月, 2004 简介 欧洲诊断试剂公司的抗环状瓜氨酸诊断试剂盒（抗CCP）第2代，是一种ELISA体外诊断试剂盒，通过人工合成的瓜氨酸多肽抗原与血清或血浆中的抗环状瓜氨酸肽抗体的反应，可以检测出血清或血浆中所含有的特异性抗体。由于其高特异性，该检测可用于类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的诊断。在该试剂盒中，可做96个检测。该试剂盒即可做定性检测，又可作定量检测（利用标准曲线）。参考标准和对照推荐做复孔检测，样品可以做单孔也可以做复孔。同时该 试剂盒含有测试所需的所有试剂。 该试剂盒只被专业实验室的专业人员使用。 介绍 类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）是一种最常见的系统性自身免疫疾病。目前，该病影响到全世界1-2%人的口，但是病因学尚不清楚。类风湿关节炎的诊断目前主要依赖于通过该病的临床症状来判断。仅有的血清学检测是判断血清中是否含有类风湿因子（Rheumatoid factor）的存在。类风湿因子直接作用于IgG亚类中免疫球蛋白恒定区的抗体。但是这些抗体在其他的自身免疫疾病病人、感染病人、甚至健康人血清中（最高可达15%）也以很高的比例存在。 许多特异性更高的天然抗体在RA病人血清中被发现(1)。据报道，抗核周因子抗体（Anti-perinuclear factor，APF）存在于50%的类风湿病人体内，约具有70%的特异性（2）。最近该抗体的抗原决定簇被鉴定出来为微丝蛋白（Filaggrin）3）。临床评价研究显示这些检测在大量RA病人血清中为阳性,而且有很高的特异性(3-8)。其中抗-CCP抗体被发现可用于类风湿关节炎的早期诊断，并对RA病人的关节侵害和放射学损伤具有一定的预测价值(7,9-14)。抗CCP抗体可以在RA病人出现明显的关节损伤之前（14）被检测出。一项前瞻性群组研究显示，在没有出现明显的RA临床症状的抗CCP阳性的病人中，约有93%的病人会发展成RA，表明该抗体有非常好的阳性预期值（14）。由欧洲诊断试剂公司研发的抗环状瓜氨酸肽抗体诊断试剂盒以高度纯化的含瓜氨酸残基的合成多肽为基础，是在类风湿关节炎诊断中的极具价值的辅助诊断方式。该试剂盒采用的环状瓜氨酸肽，是从与类风湿关节炎病人自身抗体反应最佳的抗原中筛选出的（8-14）。 RA多肽免疫酶联反应的原理 抗环状瓜氨酸肽抗体诊断试剂盒是建立在酶联免疫反应的基础上。该测试使用了含瓜氨酸肽（抗原）包被的微孔板。将稀释后的病人血清或血浆被放入微孔中孵育。如果有特异抗体存在，它将会与微孔中的抗原结合。没有结合的其他成分在洗涤后会被洗掉，任何被束缚的抗体在加入辣根过氧化物酶标记的抗人的IgG后、经第2步洗涤、底物孵育之后就会被检测出来。 抗体的存在将会导致颜色的出现，颜色的深浅与所束缚的抗体的量成比例，并可通过分光光度计测出。 特异性与敏感性 抗环状瓜氨酸肽抗体所对应的抗原为人工合成的含有瓜氨酸多肽。该测试在相关的单元采用阳性病人的血清定标。标准曲线的范围从25-1600单位/毫升。由于没有抗CCP定量的国家标准，所以这些值由被欧洲诊断试剂公司选择的。其特异性和敏感性在临床研究机构中通过在311个类风湿关节炎病人、942个非类风湿关节炎病人（包括其它自身免疫基病患者）和330个健康对照中的运用而得到评价。其敏感性达到了70%, 在非类风湿关节炎病人中的特异性为97%，在健康个体中的特异性达到99%。 贮存和处理方式 - ＋2℃～＋8℃，避光保存。 - 不要使用过期的试剂。 - 建议打开包装之后立即使用。 - 任何使显色液直接见光的操作都应该避免。 - 如果下列现象发现，则表明溶液降解： 在显色液被滴到微孔板之后即呈蓝色， 第一标准物A（1600单位/毫升）， 在E450nm0.9时仅有微弱反应或无颜色的变化。 试剂盒内容 本试剂盒中的所有溶液足够完成96个样品的分析（包括标准品的分析） 标准品和对照可做复孔分析。 试剂盒内容： - 1个（12×8）的多肽包被的微孔板，即用。 - 5瓶1.2ml的标准品（阳性人血清），即用。 - 1瓶1.2ml参考对照人血清（标签上以units/ml为单位），即用。 - 1瓶1.2ml阳性对照人血清（标签上以units/ml为单位），即用。. - 1瓶1.2ml阴性对照人血清（标签上以units/ml为单位），即用。. - 1瓶15ml联接溶（过氧化物酶联接的抗人IgG抗体），即用(红色)。 - 1瓶15ml底物反应液TMB，即用