关于应用冻存后的去T细胞脐血作造血重建.docVIP

　　关于应用冻存后的去T细胞脐血作造血重建 在应用冻存后的去T细胞脐血作造血重建方面,重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)及促红细胞生成素(EPO)为日本麒麟啤酒株式会社产品。 目前的研究表明,非血缘关系的脐血移植(umbilical cordblood transplantation, CBT)也是重要的造血干细胞[1]。而脐血库的建立为开展配型不合的CBT提供了保证。但是,CBT可能发生移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD),尤其是配型不合的CBT,从而影响移植成功率。免疫毒素(immunotoxin,IT)能有效去除脐血T细胞而对造血祖细胞无明显影响[2],为预防重度GVHD提供了有效手段。我们观察了IT去除脐血T细胞后的冻存效果。报告如下。脐血收集无菌条件下在医院里正常分娩的健康产妇,在其胎盘未脱离母体前在脐带断端留取脐血标本10份,加肝素25 U/ml抗凝,置4℃冰箱存放不超过24 h。主要试剂及材料 IT为军事医学科学院基础医学研究所赠送,重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)及促红细胞生成素(EPO)为日本麒麟啤酒株式会社产品。 实验方法 1.脐血单个核细胞(mononuclear cell,MNC)的分离:取7~10 ml脐血,用4倍生理盐水进行稀释,将标本缓慢加入含淋巴细胞分离液的离心管中,2 500 r/min,离心20 min。吸出界面单个核细胞,用生理盐水洗2遍,制成所需浓度的细胞悬液。 2.IT处理脐血的方法[2]:将脐血标本分成2份,一份为全血,另一份为MNC。将脐血MNC调为1106/ml~1107/ml,悬浮于10%胎牛血清(fetus calf serum, FCS)-1640-100mmol/L半乳糖体系中,使抗CD5T细胞免疫毒素(CD5ricin,10-10mmol/L)分别作用于上述细胞悬液,在37℃、5%CO2饱和湿度的条件下孵育2 h,以1 640液洗2遍。并分别制成所需浓度的细胞悬液。按下述5的方法冻存。 3.锥虫蓝染色法测定细胞活力 4.造血细胞的培养:脐血MNC及全血的造血祖细胞培养:粒-单系集落形成单位(colony forming unit-granulocyte andmacrophage CFU-GM);红系集落形成单位(burst forming unit-erythroid,BFU-E)按在清髓性造血干细胞移植研究方面，我们采用新的非清髓预处理方案对3例53~59岁的高龄血液病患者进行了非清髓异基因外周造血干细胞移植(NAST),获得成功,报告如下。 3例患者,男2例,女1例,年龄分别为59岁、53岁和56岁,原发病为再生障碍性贫血(简称再障)2例、难治性急性髓系白血病1例。3例供、受者的HLA配型完全相合,均采用STR-PCR定量方法检测供者细胞植入情况。2例再障的预处理方案为:环孢素A(CsA)5 mgbull;kg-1bull;d-1,共5 d,抗胸腺细胞球蛋白(ATG,武汉生物制品研究所)15~20 mgbull;kg-1bull;d-1,共5 d,环磷酰胺(CTX)40~50 mgbull;kg-1bull;d-1,共2 d。1例难治性白血病的预处理方案为:在上述方案基础上加用阿糖胞苷(Ara-C),总量为0.15 g/kg,替尼泊苷100 mgbull;m-2bull;d-1,共2 d。患者输入供者外周血干细胞数分别为7.8108/kg、10.2108/kg和6.0108/kg。移植物抗宿主病(GVHD)的预防:2例采用CsA加霉酚酸酯(MMF),1例采用CsA加氨甲蝶呤(MTX)。3例患者的外周血es;109/L。2例再障患者的WBC于移植后第8 d开始恢复,第21 d血像三系基本恢复正常,另1例的WBC于移植后第12 d开始恢复,第21 d血常规恢复正常,骨髓检查提示完全缓解骨髓象。2例再障患者的供者细胞植入率均为100%,另1例为供者混合性嵌合体(50%~86%)。3例患者术后经过顺利,均未出现感染、出血。例2于移植后100 d出现皮肤I度GVHD,经泼尼松治疗后好转。随访至今,2例再障已健康存活28个月和16个月,1例白血病患者于移植后3个月因白血病复发死亡。 传统的清髓性造血干细胞移植由于相关并发症多、危险性大,不适合于年龄大或移植前有严重并发症的患者。NAST可显著降低预处理强度,加强了移植前后的免疫处理,明显减轻了传统 骨髓移植的并发症,为年龄大或因器官功能不全等不能耐受大剂量放化疗预处理的患者开辟了一条新的治疗途径。国外有人采用非清髓预处理骨髓移植治疗22例45~69岁的老年血液病患者,移植后4例早期死亡,18例可评估患者中16例植活,10例形成完全供者嵌合体,6例建立了