基因打靶技术在模式植物小立碗藓的应用.pdfVIP

植物生理学通讯 第40卷 第3期，2004年6月 369 研究通讯Research Letter 基因打靶技术在模式植物小立碗藓的应用 * 习阳 刘祥林 何奕昆 首都师范大学生物系，北京 100037 Application of Gene Targeting in Phy scomitrella p atens * XI Yang, LIU Xiang-Lin , HE Yi-Kun Dep artment of B iology, Cap ital N ormal University, Beij ing 10003 7 提要 介绍了基因打靶技术在新型模式植物小立碗藓(Physcomitrella patens)中的应用。 关键词 小立碗藓(Physcomitrella patens);基因打靶;同源重组；基因敲除 所谓基因打靶(gene targeting)，是将携带有选 小立碗藓以单倍的配子体形态占据主要生活 择标记的外源目的基因采用一定的实验方法导入受 世代，生活史经历3个发育阶段：幼小配子体时 体细胞，再通过外源DNA序列与受体细胞染色体 的丝状体、成熟配子体时的茎叶体和二倍体的孢 上同源DNA序列间发生重组，最终将外源DNA 子体时期。这为研究基因在不同发育阶段的表达 定点整合入受体细胞基因组某一确定的位点，或 [8] 调控提供了良好的材料 。 对某一预先确定的受体位点进行定点突变，导致 虽然小立碗藓具有相对简单的植体结构，但 [1] 受体细胞基因功能敲除或者点突变发生的技术 。 它的组成却与其他陆生植物无异。基因组约为 由于其可对基因产生特异性突变，这就避免了由 511 Mb,是拟南芥的4倍，和水稻基因组相差不 于随机突变方法带来的许多限制，成为功能基因 [9~12] 多，有27条染色体 。基因组相对较小，这 [2] 组学研究中最直接的遗传操作工具 。 为遗传操作带来了极大方便。 从1988年以来，人们对植物基因打靶就以 当然，小立碗藓最吸引生物学家的是它有极 各种不同形式进行了尝试。如直接将基因转入原 高的同源重组频率。为了验证基因打靶在小立碗 [3] 生质体 ，或者用根癌农杆菌介导转化人工座 藓中的可行性以及确定是否具有很高的同源重组频 [4] 位，或者基因组上原来座位 。但其随机整合频 [13] 率，Schaefer和Zryd在1997年构建了3个不同 -4 率很低(小于10)，这使得基因打靶技术在植物 的转化载体，对小立碗藓基因组中3个不同的染 [5] 基因功能组学领域的研究中受到严重的阻碍 。 色体座位进行了基因打靶试验，结果证明在含有 苔藓植物中的小立碗藓(Physcomitrella patens)是 2.3~3.6 kb同源序列的情况下，小立碗藓同源重组 一种极具分子生物学研究前景的新的遗传模式系 频率可达到93%。如此高的同源重组频率在陆地 统。它以单倍的配子体主导生活史和外源DNA 植物中绝无仅有，因而它是植物功能基因组学研 的绝大部分可以同源重组整合入特定位点等特征为 究的有利工具。 [1] 人们所重视 。被视为植物王国中新的 “绿色酵 2基因打靶在小立碗藓中的应用 母”，在植物基因功能的研究中有巨大的潜在应 自1997年在小立碗藓中基因打靶获得成功以 [2] 用价值 。