糖皮质激素泼尼松测定.docVIP

糖皮质激素泼尼松的测定，泼尼松龙，?地塞米松，并且使用液体皮质醇在人血清?耦合到串联质谱色谱 摘要 糖皮质激素是免疫抑制治疗实体器官移植中的重要组成部分。该定量方法，强的松， 泼尼松龙，地塞米松和氢化可的松在人血清中已经研制成功。利用反相液相中进行分析耦合到串联质谱色谱法。该方法进行了验证到5.4毫微克/毫升为泼尼松定量的下限和皮质醇，并在下限10.7纳克/毫升的地塞米松和泼尼松龙，低于7％的误差。该之间的天相对标准偏差介于2.9-7.1％。皮质醇分析的比较使用临床样品的建立的方法，得到15％以下差异对于28测定26。 简介 糖皮质激素是重要的药物处方免疫介导的条件，例如实体器官移植，自体免疫疾病，和恶性肿瘤。这两种合成与天然糖皮质激素具有抗炎和免疫抑制性质[1]。例如，患者长期接受泼尼松作为组合的组分免疫抑制剂治疗会产生抑制下丘脑（脑垂体）肾上腺轴（HPA），所得的在抑制内源性皮质醇浓度，如相比个人未接受强的松[2]。泼尼松的活性成分是醋酸泼尼松龙，和内源性皮质醇增加了免疫抑制能力，所以这三个化合物应测量的评估患者的HPA轴的抑制。因此，它是我们的目标制定一个可靠的定量方法强的松，强的松龙，和皮质醇水平的分析从肾移植患者免疫抑制治疗血清结合。地塞米松也在期待未来的分析方法 临床调查。这四种分析物是相似的化学结构，质量和光谱特性（图1）[ 1 ]。 这种分析方法已被用来确定糖皮质激素的浓度生物样品。记录这些物种的利用气相色谱法[3-6]，高效液相色谱法（HPLC）[7-9]和毛细管分离[10月12日]耦合到各种探测器。 HPLC技术对靶糖皮质激素所需要的10分钟分离倍或更[7-9]，使用实验室密集程序[7]，可以利用致癌溶剂[8]，并且，在使用紫外（UV）检测，从定量限不足遭受（LOQ）为预期的临床浓度[8,9]。 虽然荧光检测能获得的检测限100微克/毫升，柱前衍生要求[7]。衍生还需要用于气相色谱法，以使分析物挥发[3-6]。 液相色谱-质谱联用技术已被证明，以产生低纳克/毫升的定量尿液中的糖皮质激素混合物[ 13，15 ]，溶液[ 16 ]，血清皮质醇和血浆中的皮质醇18。过去的研究表明，肾移植患者应用糖皮质激素有潜在的糖皮质激素浓度在低毫微克/毫升范围[19,20]。在这里，我们描述了一个简单的，坚固耐用的方法验证的同时定量强的松，泼尼松龙，皮质醇和地塞米松从500微升的人血清的使用液相色谱以电喷雾电离与串联质谱法（esi-lc / MS / MS）。此方法是使用在临床药理学研究的支持人肾移植受者。 2.实验 2.1 化学品 糖皮质激素和溴内部标准购自Sigma -奥德里奇（路易斯，莫，美国）。水、乙酸、醋酸铵和甲醇从Fisher Scientific购买（美丽的草坪，新泽西州，美国）。从VWR乙腈（South Plainfield，新泽西州，美国）。用于样品制备和分离的所有溶剂HPLC级。血清用于去除皮质醇和用于制备标准和质量控制是从谷生物医学（温彻斯特，VA，USA）。 2.2 仪器仪表 LC / MS / MS系统由安捷伦科技1100系列自动进样器，（帕洛阿尔托，CA，USA）泵，脱气器，和应用生物PE SCIEX API 3000，质谱仪（美国城市，加利福尼亚州，美国）配备了一个涡轮增压离子喷雾源。系统通过控制分析师软件，1.1版美国应用生物系统公司。 2.3 分离条件 分析物在沃特世公司分离（米尔福德，MA，USA）Symmetry C18柱，30mm×2.1mm 内径3.5mm，颗粒大小，前面的水域的对称性盾牌保护柱，×2.1mm内径10mm的注射体积为10 L。移动相的解决方案包括甲醇和5mm的醋酸盐缓冲液，pH值3.25。从70到10%的乙酸盐缓冲液中的移动相调整4.10分钟的流量为400升/分钟之前进入电喷雾源房，流分1:1的使用PEEK管器（Upchurch Scientific，橡树港，华盛顿州，美国），用一根管子引导废物和其他质谱仪的来源。 2.4 样品制备 对于标准的解决方案，50升的1毫克/毫升的储备溶液强的松和皮质醇和100微升的1毫克/毫升的储备溶液加入地塞米松和泼尼松方案至1700微升的50 / 50甲醇/乙腈溶液。串行该混合物于50 / 50甲醇/乙腈稀释被用来做校准标准。第二组1mg / ml的储备溶液合并，并在血清中连续稀释，控制解决方案。对于控制解决方案，100微升的1毫克/毫升的储备溶液强的松和皮质醇与200微升地塞米松，泼尼松龙为加入600微升50/50甲醇/乙腈。60微升该溶液稀释至使用人50毫升血清治疗去除皮质醇。连续稀释该溶液被用来制造控制解决方案。控制在存储之前被分成1200等分试样。两个校准标准和对照事先作了及贮存在-70摄氏度长达3个月。 A