胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒.PDF

产品说明书 / Specification Sheet 胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒 产品编号：BSP051 一、产品简介： 本试剂盒提供独特的组份可以提取动物细胞及组织中的胞质蛋白和线粒体蛋白。该方法先将完整的有活性的线 粒体和胞质蛋白分离，再处理后获得高纯度的有活性胞质蛋白和变性的线粒体蛋白，不需要超速度离心，方法简单， 可靠，快速。可用于1D，2D电泳，Western Blot，Elisa等蛋白质实验。提取的完整线粒体也可以经过活性溶解液 处理，再用于免疫共沉淀，凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学研究，或进行线粒体DNA提取，用于基因组学后 续研究。本试剂盒可以每次从 1×107个培养细胞或 200mg 组织中提取所需要的蛋白质，可以使用 50 次。 二、产品特点： 1．整个实验过程大约只需要1小时左右。 2．可以从 50 ×107个培养细胞或 50 ×200mg 组织中提取所需要的蛋白质或活性线粒体。 3．提取的活性线粒体可以用于凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学或线粒体基因组学后续研究。 4．活性线粒体的提取量高，高效线粒体溶解Buffer提取的蛋白质，可以用于线粒体蛋白质组学研究。 5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。 三、运输和保存条件： 常温下运输，收到后，将线粒体溶解Buffer，DTT，蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂 -20度保存，胞质提取Buffer 2-8度保存，保质期1年。 四、试剂盒组成：能够使用 50 次 胞质提取Buffer 55mL 线粒体溶解Buffer 5ml 蛋白酶抑制剂 60μL 磷酸酶抑制剂 300ul DTT 60μL 五、 操作步骤： 7 1、收集不少于1×10 细胞，用冷PBS （pH7.4）洗涤细胞两次（每次3000 rpm离心5 min）；组织样本（200mg）尽 量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，于冰上剪碎，再用冷PBS （pH7.4）洗涤三次。 2、在上述细胞或组织样本中加入1mL胞质提取Buffer（注：使用前，每mL 胞质提取 Buffer加入1μL蛋白酶抑 制剂,5ul磷酸酶抑制剂和1μL DTT），置玻璃匀浆器冰上均质30～50次， 置于冰上冷却。均质破碎细胞后应 镜检，细胞破碎率不小于90％。 注意:也不要过度匀浆,以免线粒体膜破裂, 线粒体基粒和基质外流,使得胞质蛋白和线粒体蛋白的分离变得困 难。 3、将匀浆液转移至冷的离心管中，最大转速涡旋剧烈振荡 15s，放置冰上 10～15min,于4℃, 3000rmp 离心10 min， 弃沉淀。 注意:沉淀中为未破碎的细胞,细胞核和一些细胞碎片.重复步骤3 可以进一步去除上清中的残余的细胞核，细 胞碎片等杂质。 地址: 上海市松江区香闵路 698 号 Add: 698 Xiang Min Road SongJiang Shanghai China 电话/Tel: 86-21 传真/Fax: 86-21技术支持/Support: 800-820-1016 邮箱/Email: protein@ 网址/Web: 产品说明书 / Specification Sheet 4、取上清转移至新冷离心管中，于4℃, 12000rpm 离心30 min以沉淀线粒体，上清转至新管中，为胞浆蛋白，-800C 冷冻保存。 注意:如果需要得到更为纯净的胞浆蛋白.可以将在步骤4中得到的胞浆蛋白在4℃, 16000rpm 离心20 min。 弃沉淀（可能含有溶酶体，过氧化氢体的杂质和少量线粒体），保留上清。 5、取沉淀，加入0.1mL胞质提取Buffer（注：使用前，每mL 胞质提取 Buffer加入1μL蛋白酶抑制剂,5ul磷酸 酶抑制剂和1μL DTT），涡悬震荡洗涤30秒，4℃, 13000rpm 离心10 min，去上清。 6.在沉淀中加入0.1mL的线粒体溶解Buffer(使用前，每mL线粒体溶解Buffer加入1