10探究进展-- 发酵法生产辅酶Q10探究进展.docVIP

10探究进展’ 发酵法生产辅酶Q10探究进展[摘要] 辅酶Q10是一种重要的生化药物，主要生产方法有直接提取法、化学合成法与微生物发酵法，其中，微生物发酵法是最有前途的生产方法。该文综述了微生物发酵生产辅酶Q10的研究进展，内容包括辅酶Q10的生产菌种、高产菌株的选育手段、发酵培养基与发酵条件对辅酶Q10发酵的影响。 [关键词] 辅酶Q10 微生物发酵法 研究进展 1 概述 辅酶Q10是一种脂溶性的醌类化合物，化学名称为2,3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯基-1，4-二苯醌，别名癸烯醌、泛醌，分子式为C59H90O4，分子量为863.36，在室温下呈橙黄色结晶，无臭无味。辅酶Q10的生理功能与其两种生化作用密切相关：一是其具有的抗氧化能力，二是其在电子传递链上的角色，传递电子与质子，促进生成ATP。辅酶Q10还原态的、异戊二烯单体全为反式的结构比氧化态、异戊二烯单体全为顺式结构具有更高的活性和理化作用。目前辅酶Q10在医学上是一种很好的临床生化药物，常用于肝病、心血管疾病、癌症的综合治疗与提高机体的免疫力。在食品领域作为一种新型食品营养添加剂，具有增强体能与提高免疫力的作用。同时辅酶Q10对延缓衰老和提高机体免疫力有着不可代替的作用，被广泛应用于女性化妆品领域[1]。 2 辅酶Q10的生产方法 辅酶Q10的生产方法一般分为直接提取法、化学合成法、微生物发酵法等[2]。直接提取法主要从大豆、烟叶或动物内脏中进行分离和提取。提取法制备工艺较简单，但提取成本高，且受原料及季节等的限制，不适合于现代化工业大生产。化学合成法主要分为不以茄尼醇作为原料的全化学合成法、以茄尼醇作为原料的半化学合成法。化学合成法合成过程反应复杂、步骤多、转化效率低、往往还存在许多副产物，这些因素都影响了其产业化发展。微生物发酵法是目前生产辅酶Q10的最主要方法。该方法由于原料廉价丰富，产物分离过程相对简单，产物为天然品，不存在化合物手性问题，生物活性好，易被人体吸收，且可以通过发酵罐实现规模化工业化生产，因此成为最有发展潜力的辅酶Q10生产方法。 3 辅酶Q10主要产生菌及高产菌株选育 辅酶Q10产生菌大多为细菌[3]，主要包括荚膜红细菌、类球红细菌、浑球红细菌、沼泽红假单胞菌、深红红螺菌和根癌农杆菌等。通常微生物发酵产生辅酶Q10的产量在30～ 130mg/L，据估计要实现商业化生产，辅酶Q10的产量应该高于500mg/L[4]。在国际上，日本是最早开发辅酶Ｑ10的国家，报道的球红假单胞菌菌种生产水平达到770mg/L，收率达到70%以上，近几年来，韩国在辅酶Ｑ10领域的研究也较为深入，其中根癌农杆菌KCCM10413的发酵水平达到626mg/L。国内上世纪90年代开始发酵法辅酶Q10的研究，表1列出国内研究单位辅酶Q10主要菌种，目前我国多家企业参与开发和发酵生产，其中厦门金达威集团、神舟生物已经投入工业化生产，所生产的辅酶Q10产品已经占据市场相当大的份额。 辅酶Q10高产菌株主要选育方法是采用传统诱变选育辅酶Q10高产菌株，即将辅酶Q10的出发菌株经过一些诱变因子处理，如紫外诱变和NTG诱变，然后选育出营养缺陷型、抗反馈调节、抗葡萄糖分解阻遏的辅酶Q10高产菌株，表2列出国内成功选育的典例。近年也有采用基因工程育种与基因改组育种选育辅酶Q10高产菌株的相关报道[5-10]。 4 发酵培养基对辅酶Q10发酵的影响 4.1 碳、氮源对辅酶Q10发酵的影响 碳、氮源是微生物生长所需的重要营养因子，其中碳源是构成微生物细胞的骨架，为各种代谢提供能量；氮源提供微生物其它细胞结构的原材料。不同种类的蛋白质，其氨基酸的种类和含量具有一定的差异，培养基中部分氨基酸的浓度对其产物具有很大的影响，不同的微生物对碳、氮源的需求也不一样。吴祖芳等考察了玉米浆、蛋白胨、葡萄糖、酵母膏、糖蜜、蔗糖等几种碳氮源和添加物以及流加发酵生长因子对放射型根瘤菌WSH2601（Rhizobium radiobacter WSH2601）的细胞生长和辅酶Q10合成的影响[5]，实验证明，最佳碳源为蔗糖，其次为糖蜜和葡萄糖；最佳氮源为玉米浆，其次为酵母膏，蛋白胨较差些。魏宝东等考察蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、可溶性淀粉对合成辅酶Q10的影响，结果表明最佳碳源为蔗糖，辅酶Q10产量为40.54mg/L，其次是葡萄糖。 4.2 生长因子和无机盐对辅酶Q10发酵的影响 不同的生长因子对产物形成的影响具有一定的差异，如氨基酸、核酸碱基、维生素和天然氮化物在不同菌种中影响大小不同。潘春梅等[9]研究了几种促进剂对放射型根瘤菌细胞生长及其辅酶Q10发酵的影响，结果表明：VB1对辅酶Q10的合成起明显促进作用，