保健食品中α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯、二十二碳五烯酸甲酯与二十二碳六烯酸甲酯含量测定.doc

食品安全国家标准保健食品中α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯、二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯含量的测定xxxx-xx-xx实施xxxx-xx-xx发布中华人民共和国卫生部 发布 食品安全国家标准 保健食品中α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯、二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯含量的测定 xxxx-xx-xx实施 xxxx-xx-xx发布 中华人民共和国卫生部 发布 中华人民共和国卫生部 发布 2010-06-01实施 2010-××-××发布 前 言 本标准为首次发布。 食品安全国家标准 保健食品中α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯、二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯含量的测定 范围 本标准规定了保健食品中α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯（简称EPA甲酯，下同）、二十二碳五烯酸甲酯（简称DPA甲酯，下同）和二十二碳六烯酸甲酯（简称DHA甲酯，下同）的气相色谱测定方法。 本标准适用于保健品食品中α-亚麻酸甲酯、EPA甲酯、DPA甲酯、DHA甲酯含量的测定，不适用于以脂肪酸乙酯为有效成分的保健食品中α-亚麻酸甲酯、EPA甲酯、DPA甲酯、DHA甲酯含量的测定。 注1：脂肪酸乙酯型油类制品的物理鉴别见附录B。 原理 样品经酸水解后提取脂肪，其中α-亚麻酸、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳五烯酸（DPA）、二十二碳六烯酸（DHA）经酯交换生成甲酯后，通过气相色谱分离检测，以保留时间定性，外标法定量。 试剂和材料 除特别规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1　氢氧化钾（KOH）。 3.1.2　盐酸（HCl）。 3.1.3　无水乙醚（C2H5OC2H5）。 3.1.4　乙醇（CH3CH2OH）：体积分数≥95％。 3.1.5　石油醚：沸程30℃～60 3.1.6　正己烷（CH3(CH2)2CH3）：色谱纯。 3.1.7　甲醇（CH3OH）：色谱纯。 无水硫酸钠（Na2SO4）。 3.2 试剂配制 3.2.1 氢氧化钾甲醇溶液（0.5 mol/L）：称取2.8 g氢氧化钾，用甲醇溶解并定容至100 mL 3.3　标准品 3.3.1　 α-亚麻酸(C18:3n3)甲酯，纯度≥99.0％。 3.3.2　 EPA(C20:5n3)甲酯，纯度≥98.5％ 3.3.3　 DPA(C22:5n3)甲酯，纯度≥98.0 3.3.4 DHA(C22:6n3)甲酯，纯度≥98.5％。 3.4 标准溶液的配制 3.4.1 脂肪酸甲酯标准储备液：浓度分别为4.0 mg/mL。准确称取100.0 mg α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA甲酯、DHA甲酯标准物质于25.0 mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容至刻度，摇匀。此溶液应贮存于-18 3.4.2 脂肪酸甲酯混合标准中间液：浓度分别为1.0 mg/mL。分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液2.50 mL于10.0 mL 3.4.3 脂肪酸甲酯标准工作液：分别吸取脂肪酸甲酯中间液 0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL于10.0 mL容量瓶中，用正己烷定容。此浓度即为 0 mg/mL、0.040mg/mL、0.080 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、1.0 mg/mL 仪器与设备 4.1　气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）。 4.2　天平：感量为1 mg和0.1 mg。 4.3　旋转蒸发仪。 4.4　离心机：转速≥4000 r/min。 4.5　旋涡混合器。 4.6　恒温水浴锅。 分析步骤 5.1　试样制备 5.1.1　试样处理 5.1.1.1　固体试样 准确称取已粉碎混合均匀的待测试样0.500 g～2.000 g（含待测组分约5 mg/g～10 mg/g）加入50 mL比色管中，加8 mL水，混匀后再加10 mL盐酸。将试管放入70℃～80℃水浴中，每隔5 min～10 min以漩涡混合器混合一次，至试样水解完全为止，约需40 min～50 min。取出试管，加入10 mL乙醇，混合。冷却至室温后将混合物移入100 mL具塞量筒中，以25 mL无水乙醚分次洗试管，一并倒入量筒中。密塞振摇1 min。加入25 mL石油醚，密塞振摇1 min，静置、分层，将有机层经过无水硫酸钠（约5 g）滤入浓缩瓶中。再加入25 mL无水乙醚密塞振摇1 min，25 mL石油醚，密塞振摇1 min，静置、分层，将有机层经过无水硫酸钠（约5g）滤入浓缩瓶中，按“再加入15 mL无水乙醚……, 静置、分层、过无水硫酸钠”，将全部提取液用旋转蒸发仪于45 5.1.1.2　油类制品 准确称取混合均匀的油类制品0.200 g～1.000 g（含待测组分约10 mg/