张航黄曲霉毒素电化学生物传感器.docVIP

《高等分析化学》课程论文 题目：黄曲霉毒素电化学生物传感器 姓 名 张航 学 号 12021010221 院 系 化学化工学院 专 业 化学 年 级 12级2班 指导教师 刘冰 2015年 6 月 19 日摘要：黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)是一种具有强烈毒性和强致癌性的生物毒素，对其进行快速而准确的分析是减小和避免黄曲霉毒素危害的最有效手段之一。电化学生物传感器因其快速、灵敏、特异性强、易于微型化等优势在黄曲霉毒素分析受到国内外研究者的广泛关注。目前，应用于黄曲霉毒素分析的电化学生物传感器主要有免疫传感器、酶传感器和DNA传感器。 关键词：黄曲霉毒素；电化学；生物传感器 1. 电化学免疫传感器 电化学免疫传感器是基于抗原与抗体特异性识别的电化学装置，具有很高的选择性和灵敏度[1]。Micheli课题组提出基于ELISA的AF电流型免疫传感器[2-4]，其他研究者相继将电位型[5-6]、纳米型[7]和阻抗型[8-10]传感器应用于AF的免疫分析。利用辣根过氧化氢酶(HRP)[11]、胶体金[12]、生物素[13]或磁性颗粒[14]对抗体或抗原进行标记，大大提高了AF免疫传感器的灵敏度。但无标记免疫传感器因可以简化分析操作步骤也得到国内外课题组的重视[15-17]。近年来国内外研究者将纳米技术、离子液体、导电聚合物等技术应用于AF电化学免疫传感器，提高了免疫传感器的灵敏度、选择性和机械稳定性等。 1.1纳米材料 纳米材料比表面积大，可对信号进行有效放大[18]，负载更多抗体及标记物，且具有良好的生物相容性，极大提高电化学免疫传感器的灵敏度和寿命。目前金属纳米材料、碳纳米材料、量子点、脂质体、磁性纳米颗粒等已广泛应用于电化学免疫传感器中，而其中金纳米颗粒、碳纳米管、石墨烯和磁性纳米颗粒等已在AF的免疫分析中发挥了尤为明显的信号增强作用。Chen[7]等将AFB1抗体直接固定在金胶粒上，构建了电导型免疫传感器。Owino[16]等将纳米金颗粒嵌入到导电聚合物中，提高了修饰电极的机械性能。许等[19]利用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与EDC活化AFB1抗体上的羧基并与半胱胺修饰的金纳米颗粒共价连接,构建了具有高灵敏度的电流型免疫传感器。 1.2 离子液体 离子液体具有几乎可忽略的蒸气压、优异的热稳定性、高黏度、宽电化学窗口、良好的电导率和优异的生物相容性，近年来在电化学生物传感器中得到越来越多的关注。陈[20]等首先将离子液体应用于AF的电化学免疫分析。他们在玻碳电极上修饰Nafion膜后，依次滴加离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐-乙醇溶液和二氧化钛的溶胶凝胶，金纳米颗粒吸附到溶胶凝胶中以固定HRP标记的抗体并加快电子传输速率。离子液体通过离子交换嵌入到Nafion膜中，且溶胶凝胶的三维网络结构也可以防止离子液体的泄漏。该传感器在4℃，pH=6.8的PBS缓冲溶液中保存19天能维持91.4%的活性。 2．电化学酶传感器 自1962年第一个葡萄糖酶传感器的提出，酶传感器已被广泛应用于环境监测、食品安全和临床分析等领域。近年来国内外学者将电化学酶传感器应用于 AF的分析检测中。按其工作原理主要分为两类：一类是基于黄曲霉毒素氧化酶(AFO)对AFB1上双呋喃结构不饱和碳键的催化作用，另外一类是基于AF对乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制作用。Wang等[21]将AFO共价固定到多壁碳纳米管修饰的Au电极上，首次构建了AFB1电化学酶传感器。电极上只固定AFO时，检测下限为0.16μM，但若同时固定AFO和AFB1抗体，检测下限可达0.016μM。这是因为所使用的AFB1抗体能够特异识别AFB1的香豆素部分，免疫反应发生后，免疫复合物的AFB1部分依然能被AFO催化分解，大大提高了传感器的灵敏度，且传感器无需再生而可重复使用20次以上。 3．电化学DNA传感器 以DNA尤其是单链DNA为识别元素构建电化学生物传感器，具有尺寸小、易于制备、亲合力强、目标物广泛等优点，是近年来的研究热点。目前AF电化学DNA传感器主要有两类:一类是基于双链DNA的单次使用性传感器[22]，一类是基于单链DNA的可再生性传感器[23]。Banitaba等[24]对上述方法进行了改进，将DNA 双链固定到以离子液体六氟磷酸N-丁基吡啶鎓为粘结剂的炭黑电极上，AFB1检测下限达到20nM，相对标准偏差为3.8%。后来，该课题组对AFO的固定方式进行了改进，先将AFO嵌入到溶胶凝胶中，然后再固定到多壁碳