抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在毕赤酵母中的表达及 .PDF

学报 Jou nal of China Pha maceutical Unive sity 　2005, 36(1):63 ～68 63 1 1 1 1 2 2 1 苏志坚 , 吴晓萍, 郑　青 , 黄亚东 , 庞实锋 , 冯　雅 , 李校 1 2 (;, 510632 ) 【　】　:构建和表达 一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白, 在创伤皮 表面应用 时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子, 预防伤口感染和促进皮 修复。 :利用PCR 技 术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽基因和人酸性成纤维细胞生长因子基因。 再将两者作为模 板, 用PCR 方法扩增出编码融合蛋白的DNA。 将该DNA 片段插入到载体pPICZαA 中, 并利用电转法将质粒转入 毕赤酵母 smd1168 中, Zeocin 抗性筛选重组转化子。 甲醇诱导 96 h, SDS电泳检测融合蛋白的表达, 并用 Weste n-blot 杂交检测融合蛋白的免疫原性。 利用肝素亲和层析纯化融合蛋白, 同时检测融合蛋白的抑菌和促 3T3Bal/b 细胞分裂活性。:筛选出能表达相对分子质量约为19 kD 融合蛋白的重组转化株, SDS电泳 检测显示甲醇诱导96 h 后, 融合蛋白表达量达到最高, 且能与人酸性成纤维细胞生长因子抗体产生免疫反应。 融合蛋白没有抑菌活性, 而裂解产物则具有抑菌活性。此外, 融合蛋白的促细胞分裂活性与野生型人酸性成纤 维细胞生长因子相比没有明显的降低。 :获得含凝血酶切割位点的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的 融合蛋白, 并在毕赤酵母中实现了表达。 融合蛋白的裂解产物具有抑菌活性。 【】　抗菌肽;人酸性成纤维细胞生长因子;融合蛋白;毕赤酵母;构建;表达 【】　Q503 　　【】　A 　　【】　1000-5048(2005)01-0063-06 　　20 60 [ 6, 8] 。 , , , [1] 。(cec opin ) , 、。 , , (LVPRAS), 。, , [2, 3] 。 (acidic fib oblast 。 g owth facto , aFGF ) 1 　　 , 154 。 , aFGF 、 1.1　菌株和质粒 , 、 Top 10F ′、(Pichiapastoris) [4-6] 。 smd1168 pPICZαA (Invit ogen , N );DNA , 3 pET-aFGF19-154 ( [7] ;, aFGF N );DNA pPIC9- , ceAD()。