日本鳗鲡肝脏表达抗菌肽2基因的克隆与表达 - 水生生物学报 - 中国 .PDF

第 4 0 卷 第 2 期 水 生 生 物 学 报 Vol. 4 0, N o. 2 2 0 1 6 年 3 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA M a r., 2 0 1 6 doi: 10.7541/2016.35 日本鳗鲡肝脏表达抗菌肽2基因的克隆与表达 1, 2 1, 2 * 1, 2 1, 2 3 1, 2, 4 段明珠 黄 贝 梁 英 张芳芳 聂 品 黄文树 (1. 集美大学水产学院, 厦门 361021; 2. 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心, 厦门 361021; 3. 中国科学院 水生生物研究所, 武汉 430072; 4. 福建省海洋生物资源开发利用协同创新中心, 厦门 361021) 摘要: 为探讨鱼类抗菌肽基因的生物学功能, 研究应用RACE方法克隆获得了日本鳗鲡 (Anguilla japonica) 肝 脏表达抗菌肽2基因 (Liver-Expressed Antimicrobial Peptide 2, LEAP -2), 即AJLEAP -2 的cDNA序列, 全长为 450 bp, 开放阅读框编码89个氨基酸。其成熟肽含有LEAP-2保守基序“C-X5-C-X4-C-X4-C” 。AJLEAP -2基因 组结构与其他脊椎动物LEAP-2相同, 都包含有三个外显子。利用荧光定量PCR检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡 不同组织/器官中的表达, 发现其转录子在肝脏中表达量最高, 是内参基因 (β-actin ) 的6倍; 其次是肠道, 但其 表达量仅为肝脏的1/130。此外, 还检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡玻璃鳗(Glass eel)阶段的转录表达水平, 结果 显示, 玻璃鳗中AJLEAP-2 的转录表达量仅低于黑仔期的肝脏, 为黑仔鳗肠道表达量的2倍。LPS和迟缓爱德华 菌 (Edwardsiella tarda) 刺激能显著上调鳗鲡血液中AJLEAP-2 的转录表达, 刺激16h后上调倍数最高, 分别为 对照组的86倍和12倍。此外, LPS刺激72h和E. tarda 刺激8h后, 肠道中AJLEAP -2显著上调表达(P0.05), 为对 照组的8倍。Poly I:C刺激24h后, 血液中AJLEAP-2转录表达显著下调。结果表明, AJLEAP-2在日本鳗鲡抗细 菌感染过程中起重要的作用。 关键词: 抗菌肽; LEAP-2; 日本鳗鲡; 迟缓爱德华氏菌 + 中图分类号: Q344 .1 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207(2016)02-0252-09 抗菌肽 (Antimicrobial peptides) 是一类广谱抗 +4 电荷, pI9.2 。其羧基端有4 个半胱氨酸残基, 微生物多肽, 可抑制或杀死细菌、真菌、寄生虫和 C1与C3 、C2与C4各自形成二硫键, 因其是第二个 病毒等。同时, 它也是生物体非特异性免疫系统的 在肝脏中发现的大量转录表达的抗菌肽, 故命名为 重要组成部分, 也称宿主防御肽, 广泛存在于动、