脓汁与粪便标本中病原菌的检测-5.pptVIP

斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支， 营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把。 器材准备 Isolation and identification of bacteria from clinical specimens (Pus Stool) -- workflow ① culture media preparation ② isolated culture of bacteria ③ pure culture of bacteria ④ morphological examination of bacteria ⑤ biochemisty, mobility, SCT AST of bacteria ⑥ serologic test, results analysis → paper writing 医学微生物学实验综合性实验一 脓汁和粪便标本中病原菌的检测（五） 细菌的糖发酵试验 抗菌素敏感性试验 血浆凝固酶试验 半固体接种法 糖发酵试验Sugar Fermentation Test 不同细菌具有不同的糖分解酶，分解各种糖的代谢产物也各不相同，有的产酸，有的产酸又产气，据此，可以鉴别各种细菌。 糖发酵管:葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖等。 指示剂：溴甲酚紫，PH≥6.8为紫色，≤5.2为黄色。 原理：多糖→单糖→酸性产物→ pH↓→指示剂呈酸性变色。 ↘若有气体→气泡。 结果:培养基变黄色无气泡“+” ，培养基变黄色有气泡“⊕”，培养基不变色“-”。 应用:观察细菌对糖的分解情况,常用于肠道杆菌鉴定。 甲→紫黑→①葡萄糖 乙→紫黑→②乳糖 丙→粉红→③葡萄糖 丁戊→粉红→④乳糖 37℃24小时 细菌的糖发酵试验 ①食指垫在糖发酵管液面上方2～3cm处，用砂轮切割一道切痕。 ②两手握住发酵管切痕的两端，切痕线向外，两个大拇指抵住切痕的背面，用力将管子向里一扳，利用弯和拉的合力，将管子掰断。管口烧灼灭菌。 ③接种针针尖斜面取菌，伸入培养基内，在管壁上，上下研磨接种。退出接种针，烧灼灭菌。 ④管口朝向相同，放置在平皿内。 甲 乙 4 丙 丁 甲 乙 3 丙 丁 甲 乙 2 丙 丁 甲 乙 1 丙 丁 甲 乙 5 丙 丁 甲 乙 8 丙 丁 甲 乙 7 丙 丁 甲 乙 6 丙 丁 甲 乙 10 丙 丁 甲 乙 9 丙 丁 讲 台 左 右 小组实验分工 甲→紫黑菌苔Atropurpureus →①葡萄糖Glucose 乙→紫黑菌苔Atropurpureus →②乳糖Lactose 丙→粉红菌苔Pink →③葡萄糖Glucose 丁→粉红菌苔Pink →④乳糖Lactose 抗菌素敏感性试验Antibiotic Susceptibility Test Fleming and Penicillin 磺胺1907年发现，1935年临床应用。青霉素1928年发现，1941年冬首次临床应用，1945年普遍应用。 我国住院病人抗菌素使用率达70%，新生儿病房抗菌素使用率达100%。 为了避免抗菌药物使用的盲目性，防止因不合理用药，导致耐药性细菌的增多、菌群失调等问题的发生，用药前应该做药敏试验。 ※卫生部发布，2012年8月1日起实施的《抗菌药物临床应用管理办法》，规定特殊使用级抗菌药物不得在门诊使用。半年之后，医院抗菌素使用率普降一半。 纸片扩散法 Disc Agar Diffusion Method 将含有定量抗菌素的纸片，平贴在已经接种了试验细菌的平板上。纸片中的抗菌素吸收培养基的水分，溶解后不断向周围扩散，形成递减的梯度浓度。敏感细菌在纸片周围的生长受到抑制，而形成没有细菌生长的抑菌圈。 依抑菌圈的大小、有无判断敏感性。 敏感（Sensitive ）：试验细菌所引起的感染，可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。 耐药（Resistant ）：试验细菌引起的感染，不能用该种抗菌药物治愈。 ☆试验菌用量以对照琼脂平板表面生长的菌落呈密集或半密集为宜。 方法步骤 甲→金黄菌液 乙→白色菌液 丙→紫黑菌液 丁→粉红菌液 实验分工 安全警告：①～④步骤的操作必须逐个完成，手上不得同时握持菌液管和平板，以免菌液倒出来，造成污染。 ①先取菌液3～6ul ②沿平板直径拉一条细菌接种线。 ③再取菌液1次 ④旋转平板90度角，拉另一条接种线，