硫化氢在P38MAPK信号通路对肝纤维化影响中作用.pdfVIP

万方数据 Effects of hydrogen sulfide on hepatic fibrosis in rats and its relationsh ip with the P38MAPK signal pathway A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Yang Xin Jiang (Internal medicine) Supervisor: Prof. Chen Wei Gang June,2014 万方数据 万方数据 万方数据 摘要 目的： 观察硫化氢供体硫氢化钠及P38MAPK 信号通路特异性抑制剂 SB203580 对肝纤维化大鼠肝组 织形态学及胶原沉积的影响，探讨硫化氢与P38MAPK 信号通路的关系，进一步了解硫化氢对肝纤 维化作用的分子机制。 方法： 采用40% 四氯化碳棉籽油背部皮下注射联合高脂肪高胆固醇饲料及酒精的复合因素法建立肝纤 维化大鼠模型。肝纤维化模型大鼠于建模成功后分为5 组：肝纤维化组(HF 组) 、DMSO 溶剂对照组 (D 组)、硫氢化钠组(S 组)、SB203580 组(SB 组) 、SB203580+硫氢化钠组(SB+S 组) ，分别腹腔注射 生理盐水、2‰DMSO 溶液、SB203580 溶液(0.3mg/kg·d)、硫氢化钠溶液(56μmol/kg·d)、SB203580 溶液+硫氢化钠溶液(0.3mg/kg·d、56μmol/kg·d)进行干预，共4 次。各组大鼠均于干预结束后次日处 死并留取肝脏。经HE 染色观察肝组织纤维化分期，Masson 染色计算用于评估肝组织内胶原沉积的 SSS 评分，免疫组织化学染色观察肝组织I、III 型胶原蛋白的表达，RT-PCR 法检测肝组织内I、III 型胶原mRNA 表达水平，Western blot 法检测肝组织内P38MAPK、Caspase-3 蛋白表达水平。 结果： (1)HE 染色见肝纤维模型组肝脏内小叶结构紊乱，纤维结缔组织增生、假小叶形成，肝细胞变 性坏死及炎细胞浸润明显。(2) HE 染色观察肝纤维化分期，HF 组、D 组肝纤维分期较N 组显著升 高，S 组、SB 组、SB+S 组肝纤维化分期分别较HF 组、D 组下降，SB 组、S 组间无明显差异，SB+S 组肝纤维化分期较SB 组、S 组下降。(3) Masson 评价肝组织SSS 评分，HF 组、D 组SSS 评分较N 组显著升高，S 组、SB 组、SB+S 组SSS 评分分别较HF 组、D 组降低，SB+S 组SSS 评分比S 组、 SB 组低，S 组SSS 评分较SB 组无差异。(4)免疫组织化学染色及RT-PCR 法检测肝组织I、III 型胶 原蛋白及其mRNA 的表达， HF 组、D 组I、III 型胶原蛋白及其mRNA 表达较N 组显著增加，S 组、SB 组、SB+S 组I、III 型胶原蛋白及其mRNA 分别较HF 组、D 组减少，SB+S 组I、III 型胶原 蛋白及其mRNA 表达比 S 组、SB 组少，但 S 组I、III 型胶原蛋白及其mRNA 较 SB 组无差异。 (5)Western- blot 结果示：N 组、HF 组、D 组、S 组的P38MAPK 蛋白表达无差异，SB 组P38MAPK 蛋白的表达较HF 组减少，SB+