PCR假阳性的原因分析及控制措施.PDFVIP

PCR假阳性的原因分析及控制措施 南文龙，张悦勇，陈义平 (中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032) 摘 要：近二十年来，PCR作为一种重要的分子生物学技术，广泛应用于动物疫病的病原学、诊断方法、基因 工程疫苗研究、检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控实际工作。如何控制好PCR检 测的质量，减少假阳性，一直是研究者普遍关注的问题。本文分析 了PCR假阳性形成的原因，提 出预防及控制 措施，为促进实验室PCR实践工作提供参考。 关键词：PCR；假阳性：原因分析；控制措施 中图分类号：Q7 文献标识码：A 文章编号：1005—944X (2015)08—0056—03 CauseAnalysisandControlM easuresforFalse-positiveReactionsinPCRAssays Abstract：Inthepasttwodecades，asanimportanttechnologyinmolecularbiology，PCR hasbeenwidelyused intheresearch，preventionandcontrolofanimaldiseases．How tocontrolthequalityofPCR assaysandreducethe false—positiverate，arealwayshteproblemsconcernedbytheresearchers．TopromotehtelaboratoryPCR practice， thereasonsforformationofPCRfalse-positiveresults，wereanalyzedinthispaperandthepreventionandelimination measureswererecommended． Keywords：PCR； false—positive；causeanalysis；controlmeasures PCR是一种快速、敏感的分子检测方法，通 PCR实践工作提供参考。 过使用特定的引物，将微量的模板DNA在 DNA 1 假阳性形成的原因 聚合酶作用下进行指数扩增，再对扩增放大后的“信 一 般来说，假阳性多数是 由污染造成的。 号”进行识别，大大提升了对病原微生物的检测能 1．1 “一般性污染”造成的假阳性 力。各省、市级动物疫病防控机构及规模化养殖企 “一般性污染”指模板核酸污染于试剂、耗材、 业普遍配置 PCR仪，PCR技术 已广泛应用于检验 设备或环境。若这种情况发生，通常每个检测样品 检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物 都会受到污染，而污染后的样品检测均为阳性，这 疫病防控工作 。 也是导致PCR检测假阳性发生的主要原因之一 2【]。 假阳性是指检测阴性样 品时，得出阳性结果。 这种类型的污染大致可分为两类，第一类是 “工厂 PCR技术具有较高的敏感性，这是其突出的优势， 源性的污染”，指试剂、耗材在 出厂时已经发生污 但也容易出现假阳性，被检样品即使污染了微量的 染，原因可能是其制备过程 中或在工厂环境里受到 模板核酸，也会被检测为阳性 。1988年，Lo等 ¨] 污染。很多试剂和酶的制备过程涉及使用酵母、真 首次报道 了PCR假阳性，在检测HBV过程中，由 菌 (如溶细胞酶)，而在 DNA提取时如使用受污 于PCR引物污染了含有HBV全长基因的质粒，导 染的试剂处理检测样品，就会导致假阳性的发生。 致检测时出现假阳性。在 PCR检测 中，如何有效 Rimek等 口发现，来源于 2个不同厂家的不同批 避免假阳性、控制并去除潜在的风险，一直是研究 次的溶细胞酶，都含有真菌DNA，采用真菌通用 者普遍关注的问题。本文拟分析讨论PCR假阳性