HPLC法测定头风平中丹参素含量.doc

HPLC法测定头风平中丹参素含量[摘要] 目的：建立测定头风平中丹参素含量的高效液相色谱法。方法：采用Kromasil 0DS C18色谱柱,二甲基甲酰胺-冰乙酸-水(5.5∶0.35∶94.15)为流动相，流速1.0 ml/min，柱温35℃,检测波长279 nm。结果：本方法测定头风平中丹参素的含量，回收率为97．12％，RSD为0.63％。结论：本方法快速、简便、准确，可作为头风平中丹参素的含量测定方法。 [关键词] 头风平；丹参素；高效液相色谱；含量测定 [中图分类号]R917[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2007）06（b）-154-02 头风平由丹参、细辛、白芷、辛夷等组成，具有祛风止痛、活血通络的功效。用于风寒凝滞，瘀血阻络引起的偏头痛。本文采用高效液相色谱法对该制剂中的丹参素进行了含量测定，为控制头风平的内在质量提供了依据。 1 材料与方法 1.1仪器 Waters 510泵，Waters 48l紫外检测器，Waters TCM柱温箱，T7725i进样器，Echrom98l工作站。超声波清洗相：150W，天鹏电子新技术(北京)，Hangping FA1104型万分之一分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造)。 1.2试剂 丹参素钠对照品(含量99．16％，上海医科大学天然药物教研室提供)，N，N-二甲基甲酰胺(色谱纯，天津科密欧化学试剂开发中心)；冰乙酸(分析纯，天津科密欧化学试剂开发中心)；甲醇(色谱纯，江苏百林科技有限公司)；水(乐百氏纯净水，乐百氏广东食品饮料有限公司)。 2 结果 2.1对照品溶液的制备 精密称取丹参素钠对照品10 mg，置50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，振摇使之溶解，摇匀，精密量取1 ml，置5 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得(含丹参素0.036 mg/ml)。 2.2色谱条件 色谱柱Kromasil 0DS C18柱(200 mm×4．6 mm、5 μm)；二甲基甲酰胺-冰乙酸-水(5.5∶0.35∶94.15)为流动相，流速1.0 ml/min，柱温35℃，检测波长279 nm。理论板数按丹参素峰计不少于6 000。 2.3供试品溶液制备 取本品内容物，研细，取1 g，精密称定，精密加50％甲醇25 ml，称定重量，超声处理10 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。 2.4阴性试验 取阴性(缺丹参)对照品，按供试品溶液的制备方法制得空白对照品溶液，进样，测定。 结果是空白对照品在与丹参素色谱峰相对应位置处无干扰,见图1。 2.5线性关系的考察 精密称取丹参素钠对照品10.2 mg，置于50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，振摇使之溶解，摇匀，作为贮备液(0.183 6 mg/ml )。精密吸取贮备液1、2、3、4、5 ml，置于10 ml容量瓶中，加水定容，摇匀，分别进样10 μl，测定峰面积积分值Y，对照品量X，作线性回归,求得同归方程：Y=623.202 6X+0.116 0，r=0.999 82。结果表明丹参素在0.02～0.09 mg/ml范围内线性关系良好，为一基本通过坐标原点的直线，可用外标一点法测定丹参素的含量。 2.6精密度试验 精密吸取丹参素对照品溶液(0.046 2 mg/ml)，注入液相色谱仪，连续5次，10 μl/次，记录各次峰面积，并进行统计，结果RSD=0.42％。 2.7重现性试验 取批号041012头风平样品，研细，取5份，精密称定，分别按样品测定法测定，结果丹参素平均含量为0.062 8％，RSD =0.57％。 2.8对照品溶液的稳定性试验 精密吸取置于白色容量瓶中的丹参素对照品水溶液(0.036 72 mg/m1)，10 μl/次，注入液相色谱仪，于第0、1、2、4、6、8、24、48、72 小时各进样1次，记录峰面积，结果RSD=0.89％，表明保存于白色瓶中的丹参素对照品溶液在72 h内稳定。 2.9 回收率测定 取批号041012头风平样品(含量0.062 8％),研细，取5 g，共3份，精密称定，加入含量0.36 mg/ml丹参素的对照品溶液10 ml，50%甲醇15 ml，称定重量；再取批号010208头风平阴性(缺丹参)样品，研细，取5 g，共3份，精密称定，加入含量0．36 mg/ml丹参素的对照品溶液20 ml，50％甲醇5 ml，称定重量，超声处理10 min，放冷，再称定重量，用水补充减失的重量，摇匀，滤过，取各续滤液进样测定。丹参素回收率测定结果见表1。 2.10样品中丹参素的