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hTERT启动子介导自杀基因在肿瘤细胞中靶向表达李 军 综述 蔡绍皙 杨应斌 审校 文章编号：1009-5519（2007）03-0353-02 中图分类号：R34 文献标识码：A 肿瘤的基因治疗中，如何保证自杀基因只在特异性组织或细胞中表达而不在人正常组织细胞中表达是一个亟待解决的问题。与特异性组织来源的启动子如CEA启动子、AFP启动子、Tyr启动子等启动子相比，运用hTERT启动子能够驱动自杀基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中靶向表达，更具广谱性，因此在肿瘤治疗中成为一个有广阔前景的新方法。 1　端粒、端粒酶与肿瘤 端粒是真核生物线性染色体末端一种特殊的异质化结构，其功能是稳定染色体、避免染色体重组和降解，并参与染色体在核内的定位和基因的表达调控。端粒酶是一种专一的逆转录酶，能以自身RNA组分为模板，通过在染色体端粒末端加入六聚体的TTAGGG重复序列来维持端粒的长度。端粒酶在肿瘤的发生、发展过程中起着非常重要的作用，已发现在85％以上的原发性肿瘤中有端粒酶的活化表达，端粒酶活化参与细胞的癌变过程已得到肯定，是迄今为止最为广谱的肿瘤分子标志物。 人端粒酶由RNA组分（hTR）、催化亚单位（hTERT）和相关蛋白1（TEP1）三个亚单位组成。hTR是合成端粒DNA的模板，hTERT是一种RNA依赖的DNA多聚酶，hTERT对端粒酶的活性起着最为重要的作用，且仅存在于端粒酶阳性表达的细胞中，它的表达是端粒酶活性激活的关键步骤。在成熟分化的正常体细胞中hTERT基因的表达处于关闭状态，当细胞通过外源性强制表达hTERT基因而重获端粒酶活性时，这些细胞就能够延长存活周期。 2　hTERT启动子及其调控 hTERT基因启动子区域缺乏TATA盒及TATA相似序列，其结构是富含GC(含量为71.3%)的CpG岛，转录起始元件(CCTCTCC)位于转录起始点上游第三位，转录起始点上游181 bp是核心启动子区,在该区发现有多个转录因子结合位点,如c-myc蛋白、Mad1、SP1、P53、WT1及E2F等。CpG岛的形成增加了DNA甲基化的机会,从而对端粒酶的活性有所调节。Dessain等[1]的研究发现,仅有一部分细胞在去甲基化处理后表现出端粒酶活性,认为甲基化并不是转录调控的主要机制。也有研究表明：有一些端粒酶阴性的细胞，hTERT基因是非甲基化或者低甲基化的，提示有其他抑制hTERT表达的机制，而在一些端粒酶阳性的肿瘤和培养细胞中，hTERT的CpG岛甲基化程度与hTERT的表达之间并没有一定的关系。以上资料表明，CpG岛的甲基化可能对hTERT的表达有抑制作用,但对于端粒酶阴性的细胞中，究竟是什么原因造成hTERT表达的抑制,还需要更多的研究去阐明。c-myc是hTERT转录的直接激活因子之一；p53基因和c-myc通路上的Mad1基因是hTERT转录的抑制因子，p53可能是通过转录因子Spl与启动子区的结合位点相结合而起作用[2]。 3　hTERT启动子介导自杀基因在肿瘤细胞中的特异性表达 3.1自杀基因：自杀基因导入细胞后编码产生特殊的酶将无毒性的前体药物代谢成细胞毒性产物从而杀死细胞，已成为肿瘤治疗中的研究热点之一。目前研究较多的自杀基因是大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(TK)基因。CD基因编码胞嘧啶脱氨酶，该酶可将胞嘧啶代谢为尿嘧啶，使细胞内无毒性的5-氟胞嘧啶(5-FC)脱氨变成5-氟尿嘧啶(5-FU)，干扰RNA和DNA的合成。TK基因编码胸苷激酶,该酶可将无毒性抗病毒药物丙氧鸟苷(GCV)代谢为二磷酸化合物,后者在细胞内酶的作用下成为有毒性的三磷酸GCV抑制细胞DNA聚合酶。 3.2hTERT启动子调控的自杀基因的特异性表达：在成熟分化的体细胞中hTERT基因的表达处于关闭状态，而在肿瘤细胞中该基因主要是在转录水平上被组成型激活[3]，因此，当hTERT启动子介导自杀基因转染正常体细胞和肿瘤细胞时，正常体细胞没有特定的转录激活因子,不能转录出特定的mRNA,也就不能表达相应的蛋白,而肿瘤细胞中具有该转录活性，能激活特定蛋白的表达，肿瘤细胞自然会特异性地表达出自杀基因的活性，正常体细胞则不能。 hTERT启动子介导的自杀基因靶向杀伤肿瘤细胞在体内外都做了很多试验，在大多数的实验中，人们发现hTERT启动子保持活性的最短核心启动子区（～180 bp）与整个启动子的活性相当。Komata T等[4]的研究发现在端粒酶阳性的恶性胶质瘤细胞中转录起始位点上游378bp的区域hTERT启动子活性比起始位点上游181 bp的区域高2～40倍。Richard等[5]构建了含有hTERT-TK基因的慢病毒载体并转染HT-1080细胞、293