不同灌洗液及麻醉方法对膀胱大量灌注家兔脑水肿影响.doc

不同灌洗液及麻醉方法对膀胱大量灌注家兔脑水肿影响[摘要] 目的 探讨不同灌洗液、不同麻醉对膀胱大量灌注后家兔脑水肿的影响,为预防临床大量膀胱灌注引起的脑水肿提供理论依据。方法 健康雄性家兔20只,体重(3.5±0.3)kg,随机分为4组(n=5):A组(腰麻+5%葡萄糖注射液)、B组(腰麻+5%甘露醇注射液)、C组(丙泊酚全麻+5%葡萄糖注射液)、D组(丙泊酚全麻+5%甘露醇注射液)。所有家兔根据不同处理方式制作相应模型。所有家兔均在实验前后抽取静脉血查血糖和血清钠浓度;干-湿重法检测脑组织的含水量;免疫组化法检测AQP4表达。结果 A组与C组灌注后血糖增加明显高于B组与D组(P0.05);A 组脑组织含水量和脑组织AQP4含量明显高于其他组(P0.05),D组含量低于B组和C组(P0.05). The brain tissue water content and AQP4 level were significantly higher in Group A was significantly higher than those of other three groups(P 1.3主要试剂和药品 布比卡因由上海禾丰制药有限公司提供;丙泊酚由北京费森尤斯卡比医药有限公司提供;5%葡萄糖注射液由青州尧王制药有限公司提供;5%甘露醇注射液由山东鲁制药有限公司提供;Ⅰ抗采用鼠抗兔Aquaporin4单克隆抗体(1?150,sigma公司,美国);Ⅱ抗是辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体(1?300,sigma公司,美国);DAB显色剂由北京中杉生物技术有限公司提供。 1.4动物模型的制备 所有家兔适应性饲养7d后,术前禁食12h,禁饮8h,麻醉成功后取仰卧位固定,行耻骨联合上膀胱切开置入做好标记的静脉输液管用以膀胱压力的监测,用16G号中心静脉穿刺留置管作尿管对家兔进行插尿管,插入成功后标记刻度,用同样方法插入同样深度的另一根管,两根尿管分别接60mL注射器。一支注射器灌洗液,用静脉微量泵恒速(20mLmin-1)持续泵入;另一支注射器用于随时抽吸家兔尿液,保持膀胱压力4～6cmH2O。灌注时间为3h,家兔在灌注过程中始终保持适度的膀胱充盈,利于手术视野的清晰。灌注过程采用灌洗液加温、烤灯保暖等措施,肛温监测,保持家兔体核温度在正常范围之内(38.5～ 39.5℃)。 1.5分组与给药 根据二因素二水平析因设计,将健康雄性家兔20只,体重(3.5±0.3)kg,随机分为4组(n=5):A组(腰麻+5%葡萄糖注射液)、B组(腰麻+5%甘露醇注射液)、C组(丙泊酚全麻+5%葡萄糖注射液)、D组(丙泊酚全麻+5%甘露醇注射液)。腰麻液配制为0.75%布比卡因0.75mg/kg加10%葡萄糖共0.5mL;丙泊酚麻醉诱导剂量6mg/Kg,维持剂量24mg/(kgh)。 1.6研究指标和监测方法 1.6.1血清钠和血糖浓度的测定所有家兔分别在麻醉前和灌注结束抽耳缘静脉血2mL,静置0.5h,用离心机离心后提取血清,放入全自动生化分析仪中检测血清钠和血糖的浓度。 1.6.2脑组织含水量的测定[1]所有家兔在灌注结束后注射空气致死快速断头,剔掉颅骨,取出整个脑组织,滤纸吸取脑表面的水,将其小脑和延髓部分切除后再沿矢状面正中分成左右两部,右半大脑立即称重(湿重)后放入80℃电热恒温干燥箱24h后,再称定量(干重)。脑组织含水量按Eliot公式计算:脑组织含水量=(湿重-干重)/湿重×100%。 1.6.3病理学观察所有家兔左半脑石蜡标本切成厚度为6μm的切片,HE染色,光镜下观察脑组织的病理学。 1.6.4AQP4免疫组织化学半定量分析免疫组织化学检测(SP法)AQP4时,每批次各选取每组一只家兔2张切片,在相同条件下染色,每只家兔共染6张切片(3批次),取均值作为该家兔的定量值,取每个处理组5只家兔的平均值进行统计学分析,以减少因人工操作和试剂批次不同所带来的误差。镜下观察,切片中有棕色颗粒的地方认为是蛋白阳性表达,每张切片随机取5个视野,用医学图像数字分析系统测定每个视野的平均光密度值。 1.7统计学分析 所有数据用均数±标准差(χ±s)表示。采用SPSS13.0统计学软件进行分析,先进行方差齐性检验,组内比较采用配对t检验,组间比较用单因素方差分析,当差异有显著性时,采用SNK-q检验进一步比较;P0.05);A组与C组灌注后血糖增加明显高于B组与D组(P0.05),B组与D组之间也无明显差异(P0.05)。见表1。 A组脑组织含水量和脑组织AQP4含量明显高于其他组(P0.05),D组含量低于B组和C组(P0.05),D组含量低于B组和C组(