丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用实验探究.docVIP

丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用实验探究摘要　目的：探讨丹星通络汤对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其机制。方法：取SD雄性大鼠40只，随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、丹星通络汤组。采用栓线法复制局灶性脑缺血再灌注损伤模型。检测行组大鼠血清中乳酸(LD)含量及脑组织FAS、FAS－L的表达水平。结果：模型组大鼠血清中LD含量明显增高(P0.05)，丹星通络汤组与尼莫地平组均能显著降低血清中LD含量(P0.01)：模型组大鼠脑组织FAS及FAS－L阳性细胞数显著增多(P0.01)，丹星通络汤组与尼莫地平组能抑制脑组织FAS和FAS－L的表达(P0.01)。结论：丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制可能与其抑制脑组织FAS和FAS－L的表达，降低血清中LD含量有关。 关键词　丹星通络汤；脑缺血再灌注损伤；乳酸；FAS；FAS－L 本研究在大鼠脑缺血再灌注模型基础上，观察丹星通络汤对大鼠血清中乳酸(LD)含量的影响，分析脑组织中FAS和FAS－L的表达，以探讨丹星通络汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制，为临床防治卒中病提供实验依据。 1　资料和方法 1．1　药品和实验试剂：丹星通络汤由丹参、胆南星、三七、川芎、红花、大黄、白术、洋泻、黄芩、黄苠、防风、元参、葛根等组成，临用前配成1.0g／ml的溶液备用(大连医科大学附属二院中药局)；尼莫地平片(山西亚宝药业)；LD检测试剂盒(南京建成生物上程研究所)；FAS、FAS－L多克隆抗体(NEO MARKERS公司)；Sp即用型上作试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)；DAB显色剂(北京中山生物技术有限公司)。 1．2　实验动物及分组：选择健康SD大鼠40只，体重200～250g，随机分为4组，假手术组、模型组分别灌胃生理盐水2ml／100g，尼莫地平组灌胃2 ml/100g(浓度1 mg/ml)。丹星通络汤组灌胃0.75 ml／100 g。各组均连续灌胃7天后造模。 1．3　模型制备：除假手术组外，其余3组大鼠均参照Longa等的方法，用自制改良尼龙线栓子，腔内线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型。栓线于皮肤外留5 mm左右，缺血2小时后拔除尼龙线10 mm，再灌注24小时。假手术组栓线不捕人颈内动脉颅内段，余同上。 1．4　大鼠神经功能缺损程度评分：再灌前参照Longa等方法进行5分制神经经功能评分：0分，无明显神经病学症状；1分，不能完全伸展左前肢；2分，向左侧旋转；3分，向左侧倾倒；4分，不能自行行走。评分为1～3分者模型制备成功，余者剔除，随机补充。 1．5 实验指标及检测方法：按试剂盒说明书测定并计算血清LD含量(mmol／L)；免疫组化采用SP法，DAB显色。所用Fas、Fas－L的浓度均为1:150。光学显微镜(400倍)观察每个视野中Fas、FAS－L蛋白表达数目(胞浆棕黄色为阳性细胞)，每组随机数5个视野取其均值为本组的代表值。 1．6　统计学分析：所有资料均采用SPSSll．5统计软件包进行分析。数据采用均数±标准差表示，组间比较以one－way ANO－VA和t检验作差异的显著性分析，以P0.05为差异有显著性。 2　结果 2．1　丹星活络汤对MCAO大鼠血清中LD含量的影响。 2．2　丹星活络汤对MCAO大鼠脑组织FAS－L、FAS表达的影响。 3　讨论 祖国医学认为脑卒中急性期以痰浊和瘀血互结为本。丹星通络汤以丹参、胆南星为主，活血通络，清热化痰；三七、川芎、红花、大黄活血化瘀，白术、泽泻、黄芩清热燥湿化痰；黄苠、防风、白术益气固表；元参、葛根补阳解肌。 本研究结果显示，丹星活络汤对大鼠脑缺血再灌注后的LD、FAS、FAS－L指标均有显著改善，具有神经保护作用。Nilsson等发现LD水平增加与脑缺血有密切相关，高浓度LD与严重缺血有很好的相关性，认为LD是检测脑缺血程度有价值的特异性指标。LD含量明显升高，反映脑组织中有氧代谢降低，无氧酵解增强，脑组织能量产生减少。能量代谢衰竭是引发脑缺血后损伤机制的关键步骤。丹星活络汤能显著降低血清中LD含量，减轻LD酸中毒，表明丹星活络汤对脑缺血诱导的有氧代谢降低有较强的抑制作用，可能通过改善能量代谢，减少无氧酵解产物，稳定膜泵功能，减少自由基产生，减低Ca超载等途径减少神经元的凋亡和坏死，达到脑保护的效果。有研究报道脑缺血引起的谷氨酸(Glu)升高使星形细胞产生LD增多。Pers－son等发现乳酸的浓度与Glu水平之间呈阈值型关系，Alessan－dri等通过微透析方法将Glu灌注到大鼠脑皮层中。发现LD含量升高。本研究中观察