多囊卵巢综合征患者血清中MDA修饰蛋白抗体探究.doc

多囊卵巢综合征患者血清中MDA修饰蛋白抗体探究[摘要] 目的：研究多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清MDA修饰蛋白、抗子宫内膜抗体（EMAb）MDA修饰人血清白蛋白抗体(anti-HAS-MDA)是否较正常人高，同时探讨EMAb的特异性是否与氧化应激衍生物――过氧化物修饰蛋白有关。方法：PCOS患者20例，对照组20例，抽取静脉血取血清，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测EMAb和anti-HAS-MDA，比色法检测MDA修饰蛋白，统计EMAb是否与anti-HAS-MDA相关。结果：PCOS患者EMAb、anti-HAS-MDA和MDA修饰蛋白比对照组显著增高，且EMAb和anti-HAS-MDA的变化呈正相关。结论：PCOS患者血清中EMAb、MDA修饰蛋白的升高，证实在PCOS患者中氧化应激损伤和自身免疫反应的存在；anti-HAS-MDA和EMAb的升高呈正相关说明EMAb的特异性可能与过氧化物修饰蛋白有关，提示PCOS患者体内氧化应激损伤和自身免疫反应的内在联系。 [关键词] 多囊卵巢综合征（PCOS）；抗子宫内膜抗体；MDA修饰蛋白；MDA修饰人血清白蛋白抗体 [中图分类号] R711.75 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）04（b）-035-02 多囊卵巢综合征（PCOS）是妇科内分泌最常见的疾病之一，在育龄妇女中发病率为5%~10%。PCOS的诊断依据一般为卵巢激素如黄体生成素、卵泡刺激素紊乱、胰岛素抵抗和超声、卵巢组织学的检查等。研究认为PCOS与激素紊乱、自发性免疫反应等有关[1]，但关于氧化应激损伤及其与自发性免疫反应的联系在PCOS的情况尚待研究，因此本实验旨在研究在PCOS妇女血清中是否有MDA修饰蛋白、抗子宫内膜抗体（EMAb）和MDA修饰人血清白蛋白抗体（anti-HSA?MDA）的增高，同时探讨EMAb的特异性与是否氧化应激衍生物――过氧化物修饰蛋白有关。 1 资料与方法 1.1 一般资料 来自我院2005年9月~2007年8月妇科门诊不孕症患者40例，所有患者均知情同意参与本实验。PCOS组20例，经实验室、超声、病理和临床检查结果诊断为PCOS，实验中所有患者均无子宫内膜异位症；登记身高、体重，计算体重指数（BMI）=体重（kg）/身高2（m2）。对照组20例，诊断均无PCOS，男性不育为其不孕原因的妇女。在月经周期的12~14 d空腹抽取患者血液，自凝后离心分离血清, -20℃保存待测。 1.2 试剂 EMAb ELISA定量检测试剂盒（进口分装，上海卓康生物有限技术公司提供）；MDA检测试剂盒（南京建成生物工程研究所提供）；人血清白蛋白（Amresco公司）；羊抗人免疫球蛋白IgG（北京天坛生物制品股份有限公司提供）；聚苯乙烯微孔板 (Coring, USA)；Lanbda Bio40型紫外可见分光光度计；电热恒温鼓风干燥箱； Biofuge3336型冷冻离心机（Heraeus公司）。 1.3 EMAb的检测 检测方法采用ELISA法，按试剂说明书操作，每个样本设三个复孔，测定620 nm处吸光度值，同时设阳性和阴性血清对照。 1.4 MDA修饰蛋白的检测 MDA修饰蛋白的检测方法如下[2]：用6 mol/L硫酸800 μl和10%磷钨酸100 μl沉淀血清样本100 μl，室温放置5 min，900×g离心10 min，去上清液，沉淀部分再重复以上步骤1次；沉淀溶于蒸馏水800 μl中，加入0.14 mmol/L EDTA10 μl，0.2%苯甲醇丁酸酯80 μl，1%丙二酰硫脲200 μl，置于沸腾的水浴锅中60 min；然后取样本600 μl加入丁醇600 μl， 900×g离心15 min，取丁醇部分250 μl测定其于540 nm和620 nm处的吸光度值；1,1,3,3-氯化四乙铵溶于蒸馏水为标准对照，标准曲线（0.05，0.10，0.25， 0.50，1.00 nmol/L）r=0.992 0。所有的样本均重复3次，结果以其均数表示。 1.5 anti-HAS-MDA的检测 1.5.1 MDA修饰人血清白蛋白的制备[3]将HAS加入PBS（0.01 mol/L，含0.01% EDTA，pH7.4）中，终浓度5 mg/ml，与20 mmol/L MDA置于37℃恒温干燥箱中温育，24 h内将此溶液置于PBS溶液中透析4次，弃透析液，用MDA测试方法测定MDA修饰的蛋白浓度。 1.5.2 anti-HAS-MDA的检测聚苯乙烯微孔板每孔覆盖100 μl HAS-MDA（20 μg/ml，溶于碳酸盐缓冲液，pH 9.6），4℃过夜，用ELISA检测血清中的Anti