军团菌简介.PDF

军团菌简介 《伯杰氏细菌分类手册》1994 年第 9 版中，对军团菌（Legionella ）作了如下说 明：杆形菌，宽度0.3~0.9 μm ，长度为2~20 μm 以上，不形成内孢子或小囊，无荚 膜，不产酸，革兰氏染色阴性，借一两根或以上直的或弯曲的极鞭毛和侧鞭毛可以 运动，偶尔可见无动力菌株。需氧，生长时需 L-半胱氨酸和铁盐。氧化酶阴性或弱 阳性，硝酸盐还原试验阴性，尿素酶阴性，液化明胶。细胞壁中有支链脂肪酸。可 从有机化合物中摄取营养，可利用氨基酸作为能量来源。不发酵碳水化合物，亦不 能使之氧化。可从地表水、泥土和热水及污染的湖水和河水中分离到本菌，但从土 壤和动物中分离尚不了解，对人有致病性，DNA 的G+Cmol%含量为39~43%（TmBd ）。 军团菌属有 41 个种，61 个血清型。侵肺军团菌（Legionella pneumophila, LP ） 有 15 个血清型，是引起军团菌病的主要菌型（占 80% 以上）。军团菌病是一种急性呼吸道 传染病，临床类型目前至少有肺炎型与庞蒂阿克热型。本病主要为呼吸道飞沫(气溶胶)传播。 目前尚无证据表明感染者、病人或感染动物作为本病的传染源，通常把传染本菌的水源(天 然水、人工管道水源、冷却塔、冷热管道系统水等)作为传染源。 军团菌的检测方法——ISO11731:1998 1．范围 本标准描述了一种用于军团菌分离和估计环境样品中军团菌数量的培养方法。 该方法适用于所有环境样本，包括饮用水、工业用水和天然水以及沉淀物、沉积物和粘 土/软泥等相关样本。 2 ．培养基和试剂 2.1 Buffered Charcoal Yeast Extract agar medium （BCYE ） 2.2 Buffered Charcoal Yeast Extract medium without L-cysteine （BCYE-Cys ） 2.3 Buffered Charcoal Yeast Extract medium with selective supplements （GVPC ） 2.4 酸处理缓冲液 3 ．取样 3.1 取样容器 水样可采用玻璃、聚乙烯或类似容器。以前用过的容器应该清洗干净、扣干水分，121 ℃高压灭菌15min。如果容器不能经受高压灭菌，应在〉70℃的流动热水或流动蒸汽中处理 至少5min 。 3.2 含生物防腐剂的样品 如果水样中含有或被认为含有氧化型生物防腐剂，应在取样时或取样前加入非活性试剂 加以中和。 原则上讲，实验室接到水样后应尽快进行微生物学分析，最好是取样当天，尤其对于已 知含生物防腐剂的样品。因此，建议从样品采集到制备好浓缩样的间隔最好为 2d ，不应超 过5d，最长不超过14d。 3.3 样品运输 样品应在 6-18℃条件下被运输，应避免热和光照，最好在 1d 内，不超过2d 将样品送 到指定实验室。 4 ．制样 4.1 总则 5/l ，可以采用直接平板法。为了确保低于这个 如果液体样品军团菌的数量估计超过 10 数量样品中军团菌的检测，需采用浓缩技术。为了浓缩水样，可采用膜过滤法（4.2 ）或离 心法（4.3 ）。 4.2 膜过滤法 如果样品是浑浊的、乳浊的或有颜色的，应采用离心法。 采用膜过滤装置进行膜过滤，采用直径47-147mm ，孔径0.22 μm 和0.45 μm 的膜。过 滤后的膜应放置在带盖的无菌容器中，可用无菌剪刀剪碎，加5ml-25ml 的无菌稀释液或无 菌去离子水，不断摇动至少2min 。也可将容器放入超声波中2-10min 。 4.3 离心法 取200ml 样品于300-500ml 容积的离心瓶中，6000g 离心10min 或3000g 离心30min， 保持温度在15-25℃，弃去上清液，将沉淀物悬浮在2-20ml 无菌稀释液或无菌去离子水中。 5 ．培养 5.1 将制备好的样品（浓缩的或未浓缩的）分成3 份，1 份不做任何处理；1 份进行热处理； 1 份进行酸处理。 5.2 热处理 加1±0.5ml 样品于一无菌容器中，50 ±1℃水浴处理30 ±2min 。 5.3 酸处理 加1-10ml 样品于一拧盖的容器中，6000g 离心10min 或3000g 离心30min，用无菌枪头 吸去一半体