IgM类单克隆抗体纯化试剂盒.PDF

北京博奥龙免疫技术有限公司 IgM 类单克隆抗体纯化试剂盒 货号 规格 BF06005 可处理50ml腹水 保存温度：4℃ 保质期：1年 试剂原理：本试剂盒利用不同蛋白需要的沉淀试剂和沉淀条件不同，通过大量实验分析验证 而得到的一个与传统沉淀纯化有较大不同的精细的、具有高活性、高产率、快速以及良好重 复性的单克隆抗体的纯化方法。 试剂特点：本试剂盒特点在于纯化操作的简单化、所得抗体的高活性和高纯度。实验表明， 本试剂盒可以得到90%以上纯度的抗体；并且由于配方考究，抗体在纯化过 程中几乎没有损伤，完全保持应有的活性，实际应用极好。 适用范围：本试剂盒适用于小鼠IgM 类单克隆抗体腹水的纯化。不能用于其它Ig 类或亚类 单克隆抗体腹水的纯化。 组成 试剂名称 数量 试剂名称 数量 纯化液A 50ml 纯化液E 5ml 纯化液B 50ml 透析试剂 （固体粉末） 配8L 量 纯化液C 50ml 透析袋 4份 纯化液D 50ml 纯化步骤： 1. 从冰箱中取出试剂盒开盖放置室温，然后再将单克隆抗体腹水从冰箱中取出，室温避光 复温15min，随后用自来水边冲边摇匀快速解冻。 2. 将化开的单克隆抗体腹水12000rpm 20-30℃ （或室温）离心10-20min。 3. 先吸弃最上面浮沫和油脂，然后将上清转出到另一个干净容器或离心管；按每1ml 单克 1 2 Tel:010 第 页 共 页 QQ:473644017 北京博奥龙免疫技术有限公司 隆抗体腹水加入纯化液A （加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）1ml （必 须精确），室温避光倒转30min （隔5分钟颠倒混匀几下，或用脱色摇床轻摇）。 4. 8000rpm20-30℃离心10-20min，沉淀用纯化液B 溶解到原单克隆抗体腹水1/2体积；再 按此体积每1ml 加入纯化液C （加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）1ml （必须精确），室温避光倒转10min； 5. 8000rpm20-30℃离心10-20min，弃沉淀收集上清；每1ml 上清液加纯化液D （加前确定 没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）1ml （必须精确），室温避光倒转20min。 6. 8000rpm20-30℃离心10-20min，收集沉淀用纯化液B 收集溶解沉淀到原单克隆抗体腹水 体积的1/3，并扎入透析袋。 7. 透析袋纯水浸泡3-5分钟将其泡软，将纯化好的抗体放入用透析夹或绳扎紧。 8. 透析液用纯水溶解透析试剂粉末到8L，将要透析的抗体袋子放入。抗体体积:透析液体 积 1:100，4℃透析过夜。收集透析后抗体。 9. 以透析后抗体体积:纯化液E 的体积 9:1的比例，加入纯化液E 摇匀，静置5min。8000rpm 20-30℃离心10-20min，弃沉淀收集上清。 10. 将纯化好的抗体放入透析袋，抗体体积:透析液体积 1:50,4℃搅拌透析。每次2hr，共不 少于3次，也可以100×体积4℃静置透析白天一次，过夜一次即可。 11. 12000rpm4℃离心10-20min，收集上清测蛋白浓度并调控在5mg/ml 以内，最后加10/万 NaN3防腐并除菌过滤4℃备用。 注意事项： 1、溶血和腐败的腹水不得用于纯化。 2、离心