试析癫痫病人外周血中多药耐药基因临床意义.docVIP

试析癫痫病人外周血中多药耐药基因临床意义【中图分类号】R742.1【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2011)08－0034－02 【摘要】实验探索外周血多药耐受（MDR）基因表达与难治性癫痫耐药性的关系。实验方法是用流式细胞仪检测癫痫病人血中P-糖蛋白（Pgp）的表达。结果表明难治性癫痫组血清Pgp明显高于癫痫治疗有效组和正常对照组。结果可知， Pgp在癫痫耐药的发病机制中起重要作用, 其在外周血的高表达可作为癫痫患者耐药的一个客观指标。 【关键词】癫痫病治疗；多药耐药; 实验方法 难治性癫痫（Intractable Epilepsy简称IE）是神经学科研究的热点及难点之一，癫痫耐药是一个由多种因素参与的复杂过程, 而癫痫发作呈随机性、多样性，现行的IE诊断［1］需要经过长期的临床实践才能诊断，故极易误诊或漏诊。既往的研究主要从病人手术切除或动物模型的脑组织着手，取材的限制严重影响临床研究的开展及深入。本研究利用半定量的流式细胞仪技术检测癫痫患者外周血中Pgp的表达以探讨MDR在IE中的作用。? 1 实验对象与实验方法 1.1 病例的选择和分组 全部病例均来自2004―2008年深圳第四人民医院神经内科就诊的癫痫患者。病例组分为3组, 每组均为16例: （1）IE组（A组）: 男9例，女7例, 年龄10～46岁, 病史3～9年，均有典型癫痫发作史及脑电图表现, 符合IE诊断［1］，现联用两种一线AEDs, 检测AEDs均在正常范围; （2）药物治疗有效组（B组）: 男女各8例, 年龄12～49岁，病史2～6年，均有典型癫痫发作史及脑电图表现, 经一线AEDs正规治疗2年未发作, 至少半年未发作, 排除其他中枢神经系统疾病或占位病变；（3）健康对照组（C组）: 16名, 为本院无癫痫及其他重大疾病的健康体检者, 均无癫痫发作史，男女各8例, 年龄14～52岁。 1.2 主要实验试剂及设备 购自Beckman Coulter公司的Pgp单克隆抗体CD243-PE、IgG2a-PE、溶血素（Lysing solution）及库尔特Epics XL型流式细胞仪。 1.3 实验方法 全部标本用流式细胞仪按下列方法检测Pgp的表达相对量: （1）在检测管和同型对照管中加入肝素抗凝血100μl后, 检测管中加入CD243-PE 20μl, 对照管中加入IgG2a-PE 20μl, 混匀后室温下避光孵育30min; （2）加入溶血素溶血10min; （3） PBS洗涤2次; （4）用流式细胞仪以淋巴细胞设门, 收集1万个白细胞, 用CELL QUEST统计软件计算Pgp表达阳性的细胞百分数。 1.4 统计学处理 采用SPSS 11.5软件进行统计处理, 数据用（x±s）表示, 行ANOVA分析法中的LSD法进行检验分析，P0.05）。 ? 3 讨论 人类MDR基因族由MDR1、MDR3组成, 研究表明细胞耐药性由MDR1起主导作用, 其表型是分子量为170000的Pgp, 由1280个氨基酸组成的跨膜糖蛋白，含有两个由链区连接的相同亚基, 每个亚基都有6个疏水跨膜区和一个ATP结合位点, 是一种能量依赖性外排泵。在中枢神经系统中, Pgp广泛存在于脑毛细血管内皮细胞、脑实质的星形胶质细胞的足突, 以及大脑毛细血管质膜、蛋白质的合成、糖基化和膜转运等场所。在生理状态下Pgp可阻止外源性毒素入侵, 清除内源性有毒物质, 维持内环境的稳定，因此正常人亦可有一定的表达，本研究与之相符。当机体处于某种病理情况下（如癫痫）, 脑内内环境的改变可导致血脑屏障完整性暂时被破坏, 此时Pgp的表达发生变化，在毛细血管内皮细胞的表达限制了AEDs进入脑内，从而降低脑内药物浓度，而在神经胶质细胞和神经元细胞的表达可能阻碍了细胞内AEDs的药物作用，使其耐药。 本研究发现IE患者外周血中Pgp表达明显高于其他两组, 提示MRP耐药机制中起到了重要的作用; 药物治疗有效组Pgp表达与健康对照组比较无统计学差异, 提示单纯的药物诱导和癫痫发作本身并不能引起外周血中MRP1的上调, 其上调可能是多种因素、多种机制、多途径、多环节共同作用的结果。因此，我们在处理IE患者方面应从多途径、多种作用机制的药物着手，这也是目前新型AEDs不断问世的作用点及突破口。 鉴于AEDs经血入脑, 血中有药理作用的AEDs游离浓度与脑内起抗癫痫作用的药物浓度呈正相关关系, 检测其外周血中MDR表达可同步反映其脑组织中MDR表达水平。且外周血取材方便、可重复性强，便于临床研究、指导诊治，故检测其Pgp表达有助于对药物或手术治疗进行适时监控及指导，对IE的发病机制及临床研究具有极高的价值。但是由于MDR基因具