高中生物选修一 DNA粗提取与鉴定.ppt

课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识：提取DNA的方法 （1） DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同； （0.14mol/L的NaCl溶液,DNA溶解度最低，析出） 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而杂质沉淀，或者相反； 1、DNA的溶解性 （2） DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 一、基础知识：提取DNA的方法 （1）蛋白酶：水解蛋白质，不能水解DNA。 （2）高温：大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 （3）洗涤剂：瓦解细胞膜（主要破坏膜中的蛋白质分子）， 但对DNA没影响。 2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 （1）二苯胺：沸水浴条件下， DNA遇二苯胺 会染成蓝色 （2）甲基绿：将DNA染成绿色 3、DNA鉴定原理 二、实验设计 原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。 （一）实验材料的选取 本实验材料：新鲜鸡血细胞液 和鸡全血相比，鸡血细胞液中DNA相对含量高，保证实验能提取到足够量的DNA。 二、实验设计 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.动物细胞：加蒸馏水使细胞吸水胀破，玻璃棒搅拌可加速细胞膜和核膜破裂，过滤后收集滤液 2.植物细胞：切碎后加洗涤剂和食盐，然后充分搅拌、研磨，过滤后收集滤液；（P55问题） 二、实验设计 （三）去除滤液中的杂质 方案3：控制温度在60~75℃ 方案2：滤液中加嫩肉粉（木瓜蛋白酶） 方案1：控制NaCl溶液的浓度，反复地 溶解与析出DNA，去除杂质 前面处理后的溶液过滤，加与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物 ——粗提取DNA 用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物， 并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出（进一步提纯DNA） （四）DNA的析出与鉴定 2. DNA的鉴定 ⑴ 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml ⑵ 其中一支试管中加DNA丝状物 ⑶ 各加入二苯胺试剂4ml ⑷ 混匀后，沸水浴中加热5min ⑸ 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象： 溶解丝状物的溶液变为蓝色 （四） DNA的析出与鉴定 ① 观察DNA颜色，提取的是白色丝状物吗？ 若不是，说明DNA中的杂质较多； ②用二苯胺鉴定的结果如何？ 若出现蓝色,说明实验基本成功， 若不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低， 或是实验操作中出现错误。 四、课题成果评价 三、操作提示（P56） 五、课题延伸 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *