76个中国人遗传性非息肉病性大肠癌家系hMLH1和hMSH2基因突变.PDF

维普资讯 宣 堂塑壁 兰苤查 Q!生 旦箜 鱼鲞箜 塑 !!! epatol，Oct2007，Vo1．16，No．5 研究快报 76个中国人遗传性非息肉病性大肠癌家系hMLH1和 hMSH2基 因突变规律研究 付 蕾 ，盛剑秋 ，孙 自勤 ，韩 敏 ，黄继胜 ，牧 宏 ，韩文良 ，牛 宏 ，李爱琴 ，武子涛 ，李世荣 1，北京军区总医院消化 内科 ， 北京 100700；2．济南军区总医院消化 内科 【关键词】 遗传性非息肉病性结直肠肿瘤；突变；hMLH1基 取 DNA。 因 ：hMSH2基 因 1．3 引物 的设计 与合成 根据 GeneBank中hMLH1 StudyofmutationofhM LH1andhMSH2genesin76Chinese 基因 19个外显子及 hMSH2基 因 16个外显子 的相关 hereditarynonpolyposiscolorecatlcancerfamilies DNA序列 ，用 DNAstar软件设计 出35对 PCR 引物 ， 【Keywords】 Hereditarynonployposicoloratalcancer；Mutation； 由上海生工公司进行引物合成 。 hMLH1；hMSH2 1．4 聚合酶链反应 (polymerasechainreaction，PCR) 【Firstauthorsnameandaddress】 FULei，SHENGJianqiu， SUN Ziqing，HAN Min，HUANG Jisheng，MU Hong，NIU Hongli， 20txlPCR扩增 反应体 系包含 lOOng模板 DNA， LIAIqin，Wu Zhao，LIShirong．DepartmentofGastroenterology， dNTP终浓度 为 0．2mmol／L，Mg2+终浓度为 1．5 PLABeijingMilitary GeneralHospital；Beijing100700，China mmol／L，各外显子上下游 引物终浓度为 0．1—0，2 中图分类号 ：R575，2 文献标识码 ：A 收稿 日期 ：2007-09—15 Ixmol／L，TaqDNA多聚酶 1—1．5U。PCR反应条件 文章编号：1006—5709(2007)05—0459—03 为：94℃ 5min，94oC变性30S，引物特异性退火温度 30S，72oC延长 30S，变性一退火一延长40个循环 ，72℃ 遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditarynonpolyp— 延长5min，4oC保存。PCR产物 以1．5％琼脂糖凝胶 osiscolorectalcancer，HNPCC)是一种常染色体显性遗 (含染料 EB)电泳 ，凝胶成像仪观察产物 电泳条带情 传疾病综合征，由错配修复 (mismatchrepair，MMR)基 况 ，以DL2000DNAMarker标测 PCR产物片段大小 。 因种系突变引起 ，占所有结直肠癌的5％ 一10％ ¨。。 1．5 DNA序列测定 纯化 PCR反应产物 ，使用 DNA HNPCC的发病与人类错配修