迟缓爱德华氏菌检验程序的研究①.pdfVIP

l 2，，4 中国动物检疫 1999年 第 l6卷 第 3期 迟缓爱德华氏菌检验程序的研究① 、rl’(南京’—农—业一大学动一物医学院210095)5222／J．。』， 栏目编辑：黄保续 南 摘要 本试验研宄了迟缓德华氏茵(EdwardsieltatradaEt)的细菌学及致病因子检_神j，确定了 相应检刹指标，制定了检验程序。时不同来源的Et作分离及生化鉴定，确定10项生化鉴定指标。用 三种方法即平板法(PlateAssay，PA)、接触法(ContactHemolysis，cH)和上清法(SupernatantAs— say．SA)检测Et客血素．阳性率依次为75 、75 、57．14A 28株Et中．18／g6的胞外产物(Extra— cellularProducts，ECP)对HEP—z细胞有细胞毒性，17／28菌株有侵袭力，用ATCC15947株ECP的 抗血清进行Dot—ELISA，检测阳性率为 19／26(73．08％)。 关键词 迟缓爱德华氏茵 致病因子 检验程序 迟缓爱德华氏菌能感染多种动物，是一种重要 37℃培养24h．再划线接种于TSA。 人兽共患病的病原菌口]。特别是它可引起我国养殖 1．3．2 形态学鉴定 观察TSA上菌落形态，并作 鳗鱼及 中华鳖两薷行性败血症，导致严重的经济损 革兰氏染色、镜检。 失。 1．3．3 鉴别培养基的接种 将 TSA上菌落接种于 Et已不再被认为是条件致病菌，而是存在着致 麦康凯琼脂平板，37℃培养24h，观察结果。 病株与非致病株的差异，区分这种差异．检出致病 1．3．4 理化特性测定 参照 《兽医微生物学及免疫 株．至关重要。目前国内外尚无一个完整的Et检测 学技术》 进行氧化酶试验、运动性测定、甲基红 程序，已有的鉴定或检验仅限于细菌学常规检测 ]． (Mehylred，MR)试验以及葡萄糖、D一甘露醇、蔗糖、 尚未将致病因子检测列入检验程序。本研究旨在确 L一阿拉伯糖、赖氨酸脱羧酶、HS、丙二酸盐、靛基质 定Et的细菌学及致病因子检测指标，制定相应的致 等生化试验 病性Ft检验程序 1．4 毒力因子检测 1 材料与方法 1．4．1 溶血素检测 采用PA、CH、SA三种方法 1．1 菌株和培养 共 28株Et-其中从江苏、广东、 检测细菌溶血素 福建、湖北等地区分离 18株．其余 1o株为国外引进 1．4．2 致病性 ECP检测 的Et参考株，包括ATCC15947一DSM30052，以下 1．4．2．1 细胞毒素检测 将ECP用无血清MEM 简称 15947，由德国吉森大学Baljer教授惠赠，其余 倍比稀释，加入培养 24b长满单层HEp一2细胞的96 分别由德国中黑森洲兽医站Nih博士、美国加州卫 孔板上，5NCOt37℃培养 24h，观察结果。 生部微生物实验室Jan教授、日本官崎大学Aoki 1．4．2．2 Dot—ELISA 按常规方法进行ECP的 教授惠赠 取 80℃甘油肉汤冻存的Et菌种接种于 Dot—ELISA检测，所用抗血清为 15947株 ECP抗血 胰酪大豆蛋白胨肉汤(TSB)．37C培养 24h，再接种 清．以PBS作阴性对照 于胰酪大豆蛋白胨(TSA)平板，37℃培养 24h。 1．4．3 侵袭力检测 参照Janda等(1991)方法 1．2 胞外产物 (ECP)的提取及其抗血清制备 进行。HEp一2细胞培养在 24孔板中．长满单层后待 参照lnamura等 的方法。 用。试验前 24h，弃去营养液．换上不含抗生素的营 1．3 细菌学检测 养液。用PBS洗涤HEp一2细胞单层 3次，加入菌液， 1．3．1 细菌分离 采集患病动物