杨树细胞悬浮培养及体细胞胚胎发生的研究.PDF

第15 ~主寄~ 3 阴 !有可〈协忡犬 f: ;!: 11- VoLLi NO.3 1991年9月 Journal of Nanjing Forestry University Sept. 1991 . 杨树细胞悬浮培养及体细胞 胚胎发生的研究 ‘· 王影黄敏仁陈道明许农 (林学率) 摘要通过调整培养基中还原态氨的含量和变换使用不同浓度的2 ， 4-D ， 以小叶杨 元菌苗的茎段作为外植休，诱导并建立丁愈伤组织细胞元性朵，将其放入液体培养基 中进行振荡培养，建立起分教程度较好的悬浮细胞率。培养基中加入 MES 有利于 pH 的稳定，培养基的 pH 变化与细胞生长途率之间有密切关束。将悬浮培养产生的胚性 愈伤组织转移至困体培养基上，经诱导产生大量胚状休。不同的激素浓度、不同的元 性率和不同的渗透势，胚状体的发生能刀表现出明显的差异。通过细胞学观察，胚状 体的发育具有胚胎发生的全部过程。 关键词小叶杨;愈伤组织;细胞悬浮培养;体细跑胚胎发生 中图分类号 S 792.11 悬浮细胞培养是一种新的培养技术，起源于50年代初期，最早应用于草本植物。林木细胞 的悬浮培养则起步较晚。1981~ 1982年，Radojevic 成功地进行了欧洲棒和泡桐的悬萍培养，并 得到了再生植株[135 美国的 Durzan 和 Gupta 利用花旗松的愈伤组织进行悬浮培养，经胚状体 分化形成植株，同时，他们还进行了白云杉、火短松、乔松的悬浮培养，亦得到了胚状体[刊印度 的 Currinder S. Cheema 利用缘毛杨40年生大树上嫩叶诱导的愈伤组织进行悬浮培养，得到了 再生植株[巧，而我国至今尚未见到有关林木通过悬浮培养再生植株的报道。1989年，我们利用 中国乡土树种小叶杨(A叩叫lo.; simanii) 作实验材料，进行细胞悬浮培养，通过胚状体得到再生植 株，这不仅太大提高了小叶杨繁殖系数，也为其原生质体培养和体细胞杂交打下了良好的基 础。现将试验结果作一简要报道。 1 材料和方法 1. 1 试验材料 供试材料为小叶杨。从生长健壮的植株上剪取含3~5个休眠芽的枝条，在20(: 全光照条件 下水培3ω，取其茎和叶柄作为外植体。 1. 2 愈伤组织的诱导和继代培弊 收稿日期 1991-01-28 咆 32 南京林业大学学报 第15卷第3期 将小叶杨水培苗的嫩茎和叶柄切下，经消毒，切成1cm 的小段，接种在 MS十2 ， 4-D 2mg/L 的 M 26C 下暗培养30d ，将形成的愈伤组织转移至 MS十2 ， 4-0 1~8 mg/L 的 M. 培养基上，于 1 培养基上继代培养，每3侃继代一次。3个月后，仔细挑选淡黄色的、易于分散的愈伤组织转移 至 MS刊，4-05 mg/L 的 M.培养基上进行连续继代，建立愈伤组织细胞无性系(表1)。 表1 愈伤组织和悬浮培养基 (mg/L) Table 1 M锐Iia for callus and ωlls国lpension culture 成分 MI M. M. LI L. L.. 同 MS 同 MS 基本成分 同 MS 司 MS