试验二性染色质观察.pptVIP

实验二 性染色质观察 * 一、实验目的： 三、实验材料： 四、操作步骤： 五、结果分析： 二、实验原理： 一、实验目的： 通过实验初步掌握观察与鉴别X-染色质的简易方法，识别其形态特征及所在部位，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病，提供参考条件。 ???????? 简述用以说明性染色质而制备人体口腔粘膜鳞状上皮细胞装片的步骤。 ???????? 说明人体细胞核中X染色体数目和性染色质体数目的关系。 二、实验原理： 巴尔和伯特伦（1949）注意到一个深着色小体，并且不是和核仁就是跟核膜接近，绝大部分存在于雌猫的神经细胞和中，这种小体几乎不会出现在雄猫类似的细胞中。进一步研究表明性的二态现象出现在像有袋动物，偶蹄目动物，翼手目，食肉动物和灵长目这些有代表性的动物的大多数细胞中。然而，一些兔形动物，性别差异只在很少一些组织中观察得到。 这个染色质体，是雌性细胞区别于雄性细胞的标志。现在它通常叫做性染色质或叫做巴尔氏小体。除神经细胞外的其他细胞中的巴氏小体（直径为1μm）具有典型的平凸的外形，靠近于核膜内侧处。细胞化学上看，性染色质的福尔根反应阳性并具有用甲基绿派若宁染色很深，表示有DNA的存在。 相当多的证据已经证明性染色质是没有活性的X染色体。正常的男性，只有一个X染色体，没有性染色质（见图2.1 上）。正常女性，拥有2个X染色体，每个细胞核有一个染色质小体（图2.1下），但是一个雌性三倍体的X染色体有两个性染色质体（图2.2）。几乎没有雌性的动物的4个X染色体的每个核内有3个巴氏小体。 二、实验原理： Barr小体数 = 细胞内X染色体数 – 1 Barr小体特征及位置：它是处于失活状态的X染色体，一般位于细胞核膜内侧边缘的一个深染区（较细胞核要小），形状多样。 图2.1 图2.2 二、实验原理： 由于两个X染色体中的一个失活(小资料：三色猫)，性染色质小体可以在间期细胞核中见到。这些活包括特殊X染色体的异质化。利用放射性标记技术，Morishima 等（1962）发现了无活性的X染色体，像其他的异质染色体，他们在细胞核中较其他染色体晚些复制。另外，这些晚复制X特点是位于核的边缘，性染色质小体大多在这里被观察到。总的来说，所有的细胞都包含着一个X染色体。带有遗传上具有活性的染色质叫做常染色质，所有额外的X染色体成为异染色质的性染色质体。 证明人的口腔粘膜鳞状上皮细胞存在性染色质的方法是Ludwing和Klinger（1958）发明的，本实验使用1960年经Reynolds修改的方法。 二、实验原理： 三色猫 三毛猫，又称三色猫，指黑色、橘色与白色参杂在身上的猫，亦称为玳瑁色。 成因：因决定黑色和橘色的基因是位于X染色体上(白色基因在体染色体上)， 若是猫的基因在分化的时候随机去活性化， 可能毛色细胞内黑色基因被去活性而表现出橘色， 反之则呈现黑色， 因此绝大部分三毛猫都是雌性。在少数的例子里， 因多出一个X染色体(en:Klinefelters syndrome)或嵌合体的情况会出现三色公猫。在日本因为雄性三色猫的稀少的缘故，而被视为一种幸运的象征。 二、实验原理： 三毛猫组图 三毛猫 三毛猫 三色公猫（上） 土耳其三色猫（左） 三、实验材料： 带有油镜的显微镜 压舌板 1%水溶性硫槿染液 酒精（浓度：50%，70%，95%，100%） 二甲苯 5或6当量（N）盐酸（HCl）于滴瓶中 香柏油 载玻片 盖玻片 广口瓶或平皿 镊子 四、操作步骤： 1. 毛发根部细胞的观察: 拔取一根带有毛根的头发，自基部截取20m左右置载玻片上，小心剔下毛囊细胞(注意千万不要触及毛发干),拔去毛发干,将细胞团块散开,加一滴改良酚红染液，覆以盖片，在酒精灯上轻微加热后，静置1―5分钟，隔一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。 四、操作步骤： 2. 口腔粘膜细胞观察: 要想制备一个适合的口腔粘膜涂片将会遇到两个问题。如果你的装片不是绝对的干净，在染色的环节你将会失去上皮细胞。所以，玻片必须用去垢剂洗，而且在流水中冲洗，然后最终用70%的酒精冲洗，用火烤干他们。第二个问题较难克服，就是上皮细胞能被口腔细菌所污染。细菌特别麻烦，因为他们容易被硫槿溶液染色并且和性染色质混淆。如果碰巧他们会遮盖在上皮细胞核上面，因此，细胞提供者需要严格地用水龙头的水漱口，以便去掉松动的上皮细胞和细菌。这样的漱口应该重复两三次才能达到最好效果。 方案1: 用清洁灭菌的载片或适当的刮片，从女性口腔两侧颊部刮取上皮粘膜细胞，在原位刮取2-3次，分别涂抹在干净载片上，每次可涂1-3片，涂抹范围约1-2张盖片大小。待稍干后，滴加1-2滴改良酚红，在室温下染色1-5分钟，勿使干燥