鳗鱼赤鳍病.doc

鰻魚赤鰭病之產氣單胞菌對磺胺劑和2,4-二氨基嘧啶類 藥物的感受性試驗 林文華*、蘇杰夫、 摘要　分離自台灣養殖鰻魚之產氣單胞菌株計11株，參照國際委員會臨床實驗室的標準，採用瓊脂膠平板稀釋法，進行磺胺劑和2,4-二氨基嘧啶類藥物併用感受性試驗，結果所有測試菌株達50%生長抑制的最小抑制濃度如下：sulfadimethoxine 256 μg/mL, sulfadiazine 128 μg/mL, trimethoprim ≦0.5 μg/mL, ormetoprim 1 μg/mL, ormetoprim/sulfadimethoxine ＜1/19 μg/mL, trimethoprim/sulfadiazine ＜0.5/9.5 μg/mL。 關鍵鉰：鰻魚、產氣單胞菌、磺胺劑、二氨基嘧啶、最小抑制濃度 緒 言 Aeromonas hydrophila感染養殖鰻魚主要引起赤鰭病，以腹鰭、胸鰭、腹部皮膚呈現明顯潮紅為特徵而死亡，養殖業者都以能控制和治療本病以增加效益為考量。磺胺劑結合2,4-二氨基嘧啶類藥物當作抗菌劑，除了很廣泛使用在人類，伴侶動物和家畜禽的細菌性疾病治療外[1,2,3]，也經常應用在魚類的其他細菌性疾病的治療 [9,10]。當分開單獨使用時則要考慮其抗菌活性，對於細菌合成葉酸階段的抑制作用將會受到影響 [4]，因為兩種藥物有協同作用，無論在体內或体外都會增進其抗菌的活性 [1,5,6]，對磺胺劑有抗藥性的許多傳染病皆具有治療效果，同時劑量的使用也可以明顯減少 [1]。2,4-二氨基嘧啶類藥物（2,4-diaminopyrimidine）對於細菌和原蟲的雙氫葉酸還原(dihydrofolate reductase)有顯著性的抑制效果，而引起廣泛性選擇用於當為球蟲的治療劑 [7]，但其抗菌活性則較受到限制 [8]。因此，為了使業者在臨床上對此等藥物之併用能有正確的觀念應用於本菌引起之疾病的治療，不致於濫用而產生抗藥性細菌，增加治療控制上的困擾或造成魚体藥物殘留等公共衛生問題發生，而進行2,4-二氨基嘧啶和磺胺劑類藥物併用對本菌的感受性試驗，以提高其治療效果。 材料與方法 菌株：本試驗之菌株係由養殖鰻魚檢体病例所分離計11株。其中部份菌株來自於相關縣市家畜疾病防治所自行以培養基分離所提供。 細菌鑑定：分離之菌株經Tryptic soy agar (TSA, Difco) 培養發育後，釣取獨立之菌落以革蘭氏染色套組進行染色後鏡檢，以決定細菌之革蘭氏染色性狀及型態等特性，並進行觸（catalase）、氧化（oxidase）和O/129忍受性試驗，再依據廠商說明書選擇適當的細菌鑑定套組（API套組，BioMerieux），以常用的腸內菌和其他革蘭氏陰性桿菌鑑定之API 20E套組，依其使用方法所附說明書實施，並以APILAB軟体判讀。 藥物感受性試驗：測定Aeromonas hydrophila對sulfadimethoxine、sulfadiazine {Sigma} 和trimethoprim、ormetoprim （Roche）的最小抑制濃度（Minimal Inhibitory concentration）係依照The National Committee for Clinical Laboratory Standards（NCCLS）之方法實施瓊脂膠平板稀釋感受性試驗（agar-dilution susceptibility testing method）[11]。方法如下：將冷凍乾燥保存的菌株先以TSA broth溶解後，在TSA上畫菌純培養檢查，選取4~5個單獨菌落放入5 mL TSA broth內，置於35℃培養直到培養基的混濁度達0.5 McFarland standard（大概菌量為108CFU/mL），以無菌生理食鹽水作1:10濃度稀釋，使菌量大約為107 CFU/mL。之後，馬上取小量（約1~2 μL）放入預先準備含有各種濃度之sulfadimethoxine、sulfadiazine和ormetoprim、trimethoprim的Mueller-Hinton agar平板內，緩慢旋轉平板，將菌液均勻佈滿於培養基表面上，待表面乾後倒置於35℃培養，經16~20小時後判讀。以能明顯看到抑制生長的最低濃度判為最終的最小抑制濃度。試驗同時並以標準菌株（E. coli ATCC 25922株及Staphylococcus aureus ATCC 29231株）進行品管控制。 結 果 藥物稀釋設計：藥物感受性試驗的藥物稀釋設計，係參照The National Committee for Clinical Laboratory Standards（NCCLS）的二倍稀釋法 [11]，開始備置的