溺毒清合剂延缓慢性肾功能衰竭的试验研究.doc

溺毒清合剂延缓慢性肾功能衰竭的实验研究 周富明 李玉卿 韦先进 费德升 张忠贤 张雪峰 丁伟伟 成信法 陈华 摘要：目的：探讨溺毒清合剂延缓慢性肾衰的作用机理。方法：采用5/6肾切除造模方法复制大鼠慢性肾功能衰竭模型，实验分为假手术组、模型组、溺毒清低剂量组（简称溺低组）、溺毒清高剂量组（简称溺高组）、厄贝沙坦对照组（简称厄贝组）。对各组进行干预治疗，然后观察其肾功能变化。并进行血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA）、一氧化氮(NO）、一氧化氮酶(ET-1）检测，并对肾组织经行IV胶原、纤维连接蛋白(FN）、基质金属蛋白酶-2( MMP-2）、转化生长因子-β(TGF-β）等免疫组化检测，最后行肾组织病理检查。结果：溺毒清合剂可显著降低CRF大鼠ET-1，升高NO， 对MDA、SOD差异无统计学意义，改善肾功能方面与厄贝沙坦相当。免疫组化显示溺毒清高剂量组比模型组IV胶原、FN、MMP-2、TGF-β表达减少。结论：溺毒清合剂可显著改善CRF大鼠的肾功能，可能与其改善肾血流，降低血浆ET-1升高NO水平，从而抑制肾小球系膜细胞及间质细胞增值，通过降解Ⅳ型胶原等细胞外基质而抑制5／6肾切除大鼠残肾组织肾小球硬化，从而延缓慢性肾衰进展，与厄贝沙坦有相近的肾脏保护作用。 关键词：溺毒清合剂；慢性肾衰竭；大鼠； 慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是危害人们身体健康的危重病之一。我们根据其临床表现，以中医理论为指导，衷中参西，研制成溺毒剂用于CRF，经临床观察溺毒清合剂对CRF患者改善症状、延缓肾衰竭进展疗效理想。为了探讨溺毒清合剂治疗慢性肾衰的作用机理，我们进行了相关的动物实验。 材料与方法 1材料 1.1实验药物：溺毒清合剂（黄芪、制大黄、仙灵脾、丹参、附片、牡蛎）组成，按临床处方比例。溺毒清合剂组含生药g，溺毒清合剂组含生药g/ml，4冰箱保存。生产含药选用只雄性的体重为200±20）g的SD大鼠（浙江中医药大学提供）实验环境：浙江中医药大学实验动物中心清洁级室.3 用药方法：分好组后实验大鼠以每笼5～6只饲养，自动饮水，自由进食，饲料予以普通饲料。溺毒清合剂组含生药g/ml溺毒清合剂1ml/100gBW，给药剂量为7.5g/kg（为临床给药剂量的10倍）；溺毒清合剂组含生药g/ml溺毒清合剂1ml/100gBW，给药剂量为15g/kg（为临床给药剂量的20倍）；厄贝沙坦对照组含g/ml的厄贝沙坦溶液1.0ml/100gBW，给药剂量为50mg/kg（为临床给药剂量的10倍）。假手术组、模型对照组1.0ml/100gBW。 2.4 观察指标及检测方法：给药8周后，各组大鼠上代谢笼，测定大鼠的采食量、饮水量和尿量，并测定尿液中肌酐、尿素氮和总蛋白；用3%戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，心脏采血6ml，分离血清，自动生化仪测定血肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油，取肾脏标本甲醛固定，石蜡包埋，免疫组化查Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白(FN),转化生长因子（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-2(MMP2)；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、一氧化氮酶（ET-10检测，在浙江中医药大学实验动物中心检验室进行检测，严格按照试剂盒说明操作。肾脏标本用中性甲醛固定，石蜡包埋，常规苏木-伊红（HE）染色，切片3μm，光镜下观察。均有浙江中医药大学协助完成。 2.5免疫组化检测：用SABC法测定肾组织中Ⅳ型胶原、FN, TGF-β1、MMP-2的表达。采用图像分析系统，系统定标，每张标本按顺序选5个视野，计算每个视野内染色区域的面积及积分光密度，以均值计算每个标本的面积及积分总光密度，最后以每组的均值进行比较。 3 统计方法 用SPSS13.0统计软件计算，所有数据用(±s)表示，组间比较采用F检验。 结果 1 各组大鼠的体重、采食量、饮水量、尿量见表1 表1各组大鼠的体重、采食量、饮水量、尿量比较 只数 组别 体重(g) 采食量(g) 饮水量(ml) 尿量(ml) 模 型 组 10 431.36±47.52 26.86±4.98 72.38±26.62 42.20±12.54 溺 低 组 10 432.75±18.27 25.75±2.55 65.25±14.47 35.44±9.05 溺 高 组 10 428.37±45.90 23.13±3.40 65.13±11.26 34.09±9.05 厄 贝 组 10 411.75±30.52 26.38±3.02 63.13±15.38 3