用管碟法验证消毒剂消毒效果的可行性探讨.doc

? 2009年全国技工教育和职业培训 优秀教研成果评选活动参评论文 管碟法验证消毒剂杀菌效果的可行性研究 管碟法验证消毒剂杀菌效果的可行性研究 摘要 目的 考察管碟法验证消毒剂杀菌效果的可行性。 方法 用和悬液定量杀菌法比较了对大肠杆菌杀灭效果的影响。结果用悬液定量杀菌法悬液定量杀菌法悬液定量杀菌试验消毒剂 杀菌效果清洁和消毒工艺的监控与评价是良好的微生物检控系统的体现，药品、食品、化妆品等不仅在生产过程中会受到微生物的污染，在检验过程中也会被污染，除非生产和实验室设施的微生物污染处于受控制状态或者完全被消除（如采用隔离技术）。为了适应现代医药工业、食品工业和化妆品等的卫生管理及控制要求，使用消毒剂杀灭环境中微生物，是一项非常普遍与重要的工作，它对保证生产过程中免受或减少微生物污染起重要保障作用。??在药品生产质量管理中，对所使用的消毒剂进行杀菌效果验证也是其重要内容之一。制药企业也越来越意识到验证清洁或消毒程序的必要性。在我国，消毒剂的效力验证一般参考中华人民共和国国家标准GB15981-1995《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》和《消毒技术规范》（2002年版），常用的验证方法是悬液定量杀菌试验法用牛津杯替代片悬液定量杀菌试验法观察了消毒剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌杀灭效果。现将结果报告如下。材料试验所用消毒剂。菌悬液的制备将大肠杆菌8099和金黄色葡萄球菌ATCC653818～24h琼脂斜面新鲜培养物，用含10g/L蛋白胨0.03mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）洗下菌苔，稀释成试验所需菌悬液备用。：按无菌操作往内加入加热融化后的底层培养基20ml，用陶瓦盖覆盖，待其凝固；取加热融化后的菌层培养基20ml，待其降至规定温度将试验菌加入培养基内，摇匀，吸取5ml均匀摊布在底层培养基上，用陶瓦盖覆盖，静置约10—20min；在制备好的上等距离放置小钢管个，在小钢管内滴加欲测的标准溶液；小钢管内滴加滴加完毕，用陶瓦覆盖，小心移置培养箱内， 3724 h，取出培养好的双碟，观察纸片周围有无抑菌圈用卡尺测量抑菌圈直径。试验重复次?。中和剂选择试验试验菌为金黄色葡萄球菌ATCC6538，按《》悬液定量法进行试验，试验设8组。试验结果，第6、7、8组不长菌，第3、4、5组菌数在5×10 5 ～5×10 6 cfu/ml且组间菌数相差不超过10%，第1组不长菌或很少，第2组长菌量超过50cfu/ml，试验重复3次结果一致，为所选中和剂适宜。悬液定量杀菌试验观察结果，计算杀灭率。试验重复3次。计算各组的活菌浓度?（CFU/ML），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值:????杀灭对数值?(KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（NO）－试验组活菌浓度对数值（NX）????计算杀灭对数值时，取小数点后两位值，最后一位数可以进行数字修约。?二．试验结果 管碟法试验结果 从两次管碟法试验结果证明（见表1）：这三种消毒剂（0.1%新洁尔灭、2%戊二醛和1% 84消毒液）都对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的杀菌效果，产生了不同大小的抑菌圈。如果从抑菌圈大小分析，对大肠杆菌而言， 0.1%新洁尔灭（13.25mm）﹥0.1%戊二醛 （11.75mm） ﹥1%84（11.25mm），对金黄色葡萄球菌0.1%新洁尔灭（15.25mm）﹥1%84（13.75mm）﹥0.1%戊二醛 （12.75mm），但是结果也发现，不论是那种细菌中，阴性对照即滴加PBS缓冲液也都产生了抑菌圈，虽然此抑菌圈要比滴加消毒剂抑菌圈小很多，在抗生素效价测定中，是通过比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈大小来测定效价。而此试验只有稀释剂PBS缓冲液做的阴性对照，并不是标准品，另外消毒液杀菌过程必须要先渗透入培养基，这也与其渗透力有关，故此方法只能粗略判断消毒剂对细菌杀菌效果的影响，无法精确测出消毒剂的杀菌效力。适用于对新药或某种新消毒剂的初筛试验（初步判断药物或消毒剂是否有抑菌或杀菌作用）。 表1 管碟法测试消毒液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的消毒效果 不同菌液平板 抑菌圈大小（mm） 0.1%新洁尔灭 0.1%戊二醛 1% 84消毒液 大肠杆菌① 13 13 11 12 11 11 大肠杆菌② 13 14 12 12 11 12 阴性对照 9 9 9 9 8 8 金黄色葡萄球菌① 16 15 14 13 13 14 金黄色葡萄球菌② 14 15 12 12 14 14 阴性对照 10 9 10 10 9 9 中和剂试验结果 试验菌为金黄色葡萄球菌。试验设8组(表2)， 按悬液定量杀菌试验进行。 试验结果，