紫色杆菌素生产条件之研究-建国科技大学.doc

紫色桿菌素生產條件之研究 杜尤莉、蕭蓉禎* 建國科技大學美容科技研究所 摘 要 Chromobacterium violaceum常見於熱帶和一般亞熱帶地區，主要是分布在有河流、湖泊和土壤的地方；本身為一種紫色的細菌，而且還會將此種紫色的化合物分泌至胞外，此種化合物被命名為violacein，又稱紫色桿菌素。在紫色桿菌的生產上，目前仍停留在以細菌發酵培養的階段，本研究的目的即在於節省能量消耗，發展出省時又符合經濟效益的生產方式，以期能降低成本、大量生產violacein廣泛的應用在各種工業上。 關鍵字:紫色桿菌、紫色桿菌素、紫外線誘導 壹、前言 一、研究背景 細菌（bacterium）是原核微生物中主要的類群，其屬與細菌域。細菌的名稱通常是採用拉丁文來命名，細菌是所有生物中數量最多的一類，有的是肉眼看不見，因為個體非常小，需要藉助顯微鏡來放大百倍或數千倍才能觀察的到，已知目前最小的細菌只有0.2微米長。細菌廣泛分佈與土壤和水中或空氣裡或者於其他生物共生，人和動物的體表以及與外界相通的器官均有細菌的存在，凡是可能有生命甚至沒有生命的地方都有它的存在，可知細菌是無所不在。 代謝（metabolism）是發生在所有生物體內的化學反應的總稱，細菌的代謝可分合成代謝和分解代謝。不同的細菌會分泌不同的代謝產物，例如：綠膿桿菌會分泌多種的色素，除了綠膿菌素（呈青色）、及螢光素（呈螢光黃）外，還能分泌綠膿菌紅素（呈咖紅色）；金黃色葡萄球菌則會產生金黃色脂溶性色素（呈金黃色）。 紫色桿菌（Chromobacterium violaceum）為革蘭氏陰性菌，這株菌是好氧菌是一種球桿菌，然而在氧氣充足、營養豐富、溫度適宜的條件之下，能產生紫色的色素，因而得名。此株菌主要生長在溪流、河水、湖水和泥土裡，主要分布在熱帶和亞熱帶的區域。另外，有學者發現此菌亦可以在嗜冷的環境中生長（Lu., et al., 2009），在細菌域裡屬於適應環境很強的菌株。 C. violaceum 生長過程中會生產一種特殊的代謝產物，稱之為紫色桿菌素（violacein）。 Tobie在1935年首先從C. violaceum分離出紫色桿菌素；接著有學者進行紫色桿菌素的分子結構特性之研究，確認violacein的化學結構本身不溶於水能有效溶解於有機溶劑，例:酒精、甲醇和丙酮等溶劑中（Ballantine, et al., 1958）。多位學者的文獻中指出C. violaceum除了產生紫色桿菌素外，還會分泌一些天然的抗生素（Be Moss R.D.,1967）多位學者的研究中發現此菌在醫學及藥理領域中也有極佳的貢獻例如:具有抗菌功效 (Alves OL,et al., 2005）、抗病毒（Andrighetti-Fr?hner CR,et al., 2003）、抗寄生蟲（.Lopes S.C.P., et al. 2009）、抗氧化（Durán N., et al., 2007）以及抗腫瘤（Martins D., et al., 2010）和免疫調節甚至抗潰瘍（Antoonisamy P., et al., 2009）等特性。 二、研究動機與目的 由文獻中得知violacein是色胺酸（tryptophan）的聚合物，tryptophan提供紫色桿菌生長所需的營養，而此菌將其吸收代謝後形成violacein分泌制菌體外。trtptophan的濃度多寡會影響violacein生合成的量，而tryptophan本身價格昂貴，菌體又無法自行生合成，一定得由自然界中攝取或是人為方式添加，以人工生產方式而言是一種耗能且昂貴的過程。 本研究的目的即是要開發省時、並符合經濟效益的生產過程，希望能讓C. violaceum有效率的產生紫色桿菌素又能降低成本，進一步達到節省開銷與創造利潤的目的。 貳、研究方法 一、實驗設計 將紫色桿菌C. violaceum培養在培養基上，再根據不同的培養基成分及不同的紫外線照射時間來觀察violacein的變化，期望發展出省時又符合經濟效益的生產方式。 二、實驗步驟 1. 配置培養基: 配置培養基先取量筒裝入250 ml去離子水倒入在血清瓶子裡中，用以微量天秤取6.25克LB power及再加入4克Bacto-agar置於血清瓶中，與溶劑均勻混合後，勿使其結塊，懸鬆瓶蓋後進行高溫（121℃）高壓滅菌，此即為LA培養基20分鐘滅完菌後，需將瓶蓋旋緊，防止空氣中微生物掉落。等待LA 培養液培養基則降溫至45 ~ 50℃後（皮膚不覺得燙的溫度即可），稍微搖晃均勻後，於無菌操作台操作進行培養皿的鋪盤工作，將LA培養基倒入培養基培養皿裡中，冷卻待培養基凝固後至於4 ℃冰箱中備用冷卻。以相同的方式配置M9 salts 培養基及純水培養基（agar＋ddH2