天然药物提取工艺课件----氨基酸与蛋白质提取工艺.pptVIP

第五章 氨基酸和蛋白质提取工艺;基本要求 ;第一节 概述;2.蛋白质的等电点 蛋白质由各种氨基酸组成 不同的等电点：所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸 的数目不同，有各自等电点。 等电点偏碱性：含碱性氨基酸数目较多；组蛋白 等电点偏酸性：含酸性氨基酸数目较多； 人体体液中许多蛋白质的等电点为PH5.0左右， 所以在体内以负离子形式存在。;3.蛋白质的变性 （次级键、二硫键的破坏） 变性蛋白质和天然蛋白质最明显的差别： 溶解度降低， 同时蛋白质的黏度增加， 结晶性破坏， 生物活性丧失， 易被蛋白酶分解 ;3.蛋白质的变性 引起蛋白质变性的原因：（物理和化学） 物理因素：加热、加压、脱水、搅拌、振荡、 紫外线照射、超声波等； 化学因素：强酸、强碱、尿素、重金属盐等 在临床医学上，变性因素常常被应用于消毒及灭菌。 注意防止蛋白质变性就能有效保存蛋白质制剂 ;3.蛋白质的变性 可逆变性：当变性程度较轻时，如去除变性因素，有些蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能，称为复性 不可逆变性：许多蛋白质变性时被严重破坏，不能恢复。 ;4.蛋白质的沉淀 蛋白质沉淀：蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象。 变性蛋白质一般易于沉淀， 但也可不变性而使蛋白质沉淀。 如何聚集？ 蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷 若无外加条件，不致互相凝集； 去除这两个稳定因素（如pH调节等），蛋白质便容易凝集析出;引起蛋白质沉淀的方法： a.盐析 加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出。 常用的盐：硫酸铵，硫酸钠，氯化钠等。 各种蛋白质盐析时所需的盐浓度和pH不同，故可用于对混合蛋白质组分的分离。 ;b.重金属盐沉淀蛋白质： 蛋白质可与重金属Hg、Pb等结合成盐沉淀 沉淀的条件以pH稍大于等电点为宜，此时蛋白质分子有较多的负离子可与金属成盐。 重金属沉淀的蛋白质常是变性的，但若在低温条件下，并控制重金属离子浓度，也可用于分离制备不变性的蛋白质 临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的性质，抢救误服重金属盐中毒的病人。;c.生物碱试剂以及某些酸类沉淀蛋白质： 蛋白质可与生物碱试剂（苦味酸、鞣酸）以及某些酸（三氯乙酸、硝酸等）结合成不溶性的盐沉淀； 沉淀的条件为pH小于等电点，此时蛋白质带正电荷易与酸根负离子结合成盐； 临床血液分析时，常用此原理去除血液中的蛋白质 此类沉淀反应还可用于检查尿液中蛋白质;d.有机溶剂沉淀蛋白质： 可与水混合的有机溶剂，如酒精、甲醇、丙酮等，对水的亲和力很大，能破坏蛋白质颗粒的水化膜 在等电点时使蛋白质沉淀； 常温下，有机溶剂往往使得蛋白质变性，如酒精消毒灭菌 若在低温条件下，则变性进行较缓慢，可用于分离制备各种血浆蛋白质;e.加热凝固： 将接近等电点的蛋白质溶液加热，可使蛋白质凝固沉淀； 加热首先使蛋白质变性，有规则的肽链结构被打开呈松散状不规则的结构，分子的不对称性增加，疏水基团暴露，进而凝聚成凝胶状的蛋白块。 如煮熟的鸡蛋、蛋黄和蛋清都凝固;蛋白质的变性、沉淀、凝固相互之间有密切关系 蛋白质变性后不一定沉淀，变性的蛋白质只在等电点附件才沉淀； 沉淀的蛋白质也不一定凝固;二、蛋白质、氨基酸的分类;根据功能分类： 酶蛋白、结构蛋白和储藏蛋白 酶蛋白：数量最丰富，担任细胞中多种生化反应的催化作用； 结构蛋白：控制细胞壁的伸长；存在植物的细胞壁和细胞器中 储藏蛋白：贮藏物质，供生长利用。;按功能分类： 活性蛋白质和非活性蛋白质 活性蛋白质：酶、激素蛋白质、膜蛋白质等 非活性蛋白质：胶原蛋白、角蛋白等。;三、蛋白质、氨基酸的生理功能;三、蛋白质、氨基酸的生理功能;第二节 氨基酸和蛋白质的提取工业特性;第二节 氨基酸和蛋白质的提取工业特性;1.蛋白质的水溶液提取法 凡是能溶于水、稀盐、稀酸或稀碱的蛋白质或酶，一般都可用稀盐溶液或缓冲溶液提取。稀盐溶液有利于稳定蛋白质结构和增加蛋白质的溶解度 一般稀盐溶液用量为原材料的3-6倍体积，可一次性提取或分次提取。提取时常缓慢搅拌，以提高提取效率。 ;注意因素： 盐浓度：一般在0.02-0.2mol/L； pH：一般选择在被提取的蛋白质等电点两侧的稳定区内。 如：细胞色素C（碱性蛋白质），常用稀酸提取。 温度：蛋白质和酶都不耐热，提取时通常要求低温操作。;2.蛋白质的有机溶剂提取法 难溶于水、稀盐、稀酸或稀碱的，和脂质结合交牢固的蛋白质或酶，常