微生态制剂防治上呼吸道感染功效.docVIP

微生态制剂防治上呼吸道感染功效上呼吸道感染即中医所称“感冒”，全年皆可发病，冬春季节多发。70%～80%的感冒由病毒引起，另有约10%的为链球菌、流感嗜血杆菌、葡萄球菌、支原体或衣原体引起，但临床治疗却普遍使用抗生素。如杨永弘等[1]对某儿童医院冬季急性呼吸道感染患者的门诊处方进行了调查，发现抗生素使用率高达95%。滥用抗生素不仅造成了财物的浪费，还会破坏微生态平衡，降低免疫力，增加了耐药菌株的产生，使疾病迁延不愈或继发各种并发症[2]。因此，利用中药及微生态制剂防治感冒就成为了越来越多的医务工作者关心和研究的问题。 笔者观察了玉屏风散及甲型链球菌（alpha;-Hemolyticstrep-tococcus，简称甲链）对青霉素所致上呼吸道微生态失调小鼠口咽部菌群的调节作用，期望能从微生态角度阐释中药和微生态制剂在防治上呼吸道感染方面的作用机制。 1材料与方法 1.1材料 昆明种小白鼠（SPF级），32只，雌雄各半，体重18～22g，购自四川省医学科学院实验动物研究所[许可证号：SCXP（川）2004-16]，实验期间于云南中医学院实验动物中心层流架饲养，自由饮食。 玉屏风散中黄芪∶白术∶防风=1∶2∶1（《丹溪心法》），于云南中医学院白塔路门诊部购买，云南中医学院中药教研室鉴定。 甲型链球菌、乙型链球菌（p-hemolyticStreptococcus，简称乙链）为云南省第一人民医院微生物检验科提供的临床分离培养菌株。 1.2方法 1.2.1动物分组情况 按随机分组的方式将小白鼠分为4组：空白组、造模自然恢复组（以下简称模型组）、玉屏风散组（以下简称玉组）、玉屏风散+甲链组（以下简称玉甲组），每组8只。模型组、玉组、玉甲组连续3d腹腔注射青霉素进行造模（根据临床成人用量，按动物体表面积等效剂量计算方法，每20克小鼠体重给药0.0156g/d），空白组注射0.9%NaCl溶液；后续7d，空白组、模型组灌胃给0.9%NaCl溶液，玉组、玉甲组灌胃给玉屏风散，玉甲组同时加口咽部滴注甲型链球菌；第11～13天用乙型链球菌经口咽部滴注攻击各组小鼠。 1.2.2药液制备、给药剂量及方法 采用水煎法煎煮玉屏风散，并浓缩为100%滤液。将成人每日所需生药量按动物体表面积等效剂量计算方法换算，小鼠给药剂量为0.312g/（d20g），通过灌胃给药，连续7d。 1.2.3菌液准备 甲链接种：小鼠灌胃后半小时对口咽部滴注甲链菌液0.01mL（106CFu/mL）进行接种，之后禁水禁食2h，连续3d。 乙链攻击：小鼠口咽部滴注乙链菌液0.01mL（106CFu/mL）进行攻击，之后禁水禁食2h，连续3d。 1.2.4采样方式、采样时间及微生态指标检测 在小鼠咽后壁以医用男性拭子反复涂抹取样。样品同时在羊血培养基和巧克力培养基上培养，对菌群进行纯化、染色、镜检以及生化鉴定。 通过检测菌群密集度、甲型链球菌、菌群多样性三项指标来反映小鼠口咽部微生态情况，时间分别为：第1天（造模前）、第4天（造模后）、第11天（攻击前，即给药后）、第14天（攻击后）。 菌群密集度为每毫升样本中的菌落形成单位（colonyformingunit，CFU），甲型链球菌数量为每毫升样本中的甲链菌落形成单位，菌群多样性指标为每个样本所含的菌属数量总和。如造模后小鼠口咽部菌群种类和数量明显减少，有对抗生素不敏感的细菌出现，则表示造模成功[3-4]。 1.3统计学处理 对分布呈偏态的数据以M（QR）[中位数（四分位数间距）]表示，通过Excel2003和SPSS17.0进行统计分析。采用秩和检验，经Kruskal-WallisH检验后，两两比较进行秩转换后采用LSD法进行。 2结果 2.1造模前后小鼠口咽部菌群密集度、甲型链球菌、多样性的比较 结果显示：小鼠口咽部菌群密集度、甲链数量、菌群多样性（P=0.000，P=0.000，P=0.000）在造模后均大幅降低，经统计学比较，三项指标造模前后的差异均具有统计学意义，表明小鼠上呼吸道菌群失调模型制作成功。 2.2乙型链球菌攻击前后小鼠口咽部微生态指标比较（乙链攻击前后比较） 见表2。攻击后与攻击前相比，空白组、玉组菌群密集度减少，差异有统计学意义（P=0.010，P=0.013）；空白组、玉组和玉甲组甲链数量均明显减少，差异有统计学意义（P=0.003，P=0.000，P=0.000）；模型组菌群多样性减少，差异有统计学意义（P=0.030）。 乙链攻击后各组与空白组比较，模型组、玉组和玉甲组菌群密集度均高于空白组，差异有统计学意义（P=0.030，P=0.003，P=0.000）；玉组、玉甲组甲链数量高于空白组，差异有统计学意